TGFβ1对肝细胞再生分化及凋亡的调控作用机制

《TGFβ1对肝细胞再生分化及凋亡的调控作用机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、中国人民解放军军医进修学院博士学位论文TGF-β1对肝细胞再生分化及凋亡的调控作用机制姓名：王春雷申请学位级别：博士专业：肝胆外科指导教师：黄志强2003.5.1英文缩略词表t舢sfo丌ninggm、vthf-acto卜p】，TGF—plpm铲ammedceIldealh，PCD．⋯TGF—pR．．．．．．．．．apoptosls⋯⋯⋯⋯．⋯．apoptoticbody⋯⋯⋯．extracellularmatrix，ECMmitochondria．．caspase⋯⋯⋯⋯cytochrome⋯⋯⋯⋯．fe

2、tatbovinesemm，FBS．．conagenase⋯⋯⋯⋯．trypsln⋯⋯⋯⋯⋯⋯tqpanblue⋯⋯⋯⋯⋯⋯L-glutamine⋯⋯⋯⋯⋯．．medium．．．．．．．．．．．．．．．．．dosmosome．．．．．．．．proteoglycan⋯⋯⋯⋯⋯hvaluronidase．．．．．．．．，．．．．bepaticstellatecell，HSC⋯transf’e州n．．．．．．．．．．．．．．．．．bioluminescence．．．．．．．．．．．．t啪s凫ction．．．．．

3、．．．．．albumin，．．．．．．．．，．ethidiumbromide⋯⋯⋯一luminometer⋯⋯pmdomajn．．．．．．．．．．．．．．．．．．primaryculture⋯⋯⋯⋯，．sub—cultIlre．．．．．．．．．．．．．．．endothelin．ET．．．．．．．．．．．．．．．carbontetrachloride．．．．．．nbronectin．．．．．．．Dlasmid．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．veCOBr．．．．．．．．．．．．．．．．．。．．．．．．

4、fireflv1uciferase⋯⋯⋯⋯．⋯转化生长因子p1⋯．程序化细胞死亡转化生长网子B受体⋯⋯凋亡⋯⋯，．凋亡小体⋯⋯细胞外基质⋯⋯⋯．线粒体⋯半胱天冬酶⋯⋯⋯⋯细胞色素⋯⋯⋯胎牛血清⋯⋯⋯⋯胶原酶⋯⋯⋯⋯．．胰蛋白酶⋯⋯⋯⋯⋯台盼蓝⋯⋯左旋谷氨酰胺⋯⋯⋯⋯⋯．培养基⋯⋯⋯⋯⋯．桥粒⋯⋯⋯．．蛋白多糖⋯⋯⋯⋯透明质酸酶⋯⋯肝星状细胞⋯⋯⋯⋯．递铁蛋白⋯⋯⋯⋯．．生物发光⋯⋯⋯⋯⋯⋯．转染⋯⋯⋯⋯⋯．．白蛋白⋯⋯⋯⋯．．嗅乙非啶⋯⋯⋯⋯光照度计⋯⋯⋯⋯⋯前结构域⋯⋯⋯⋯．．原代培养⋯⋯⋯⋯．传代培养

5、⋯⋯⋯⋯⋯．内皮素⋯⋯⋯⋯四氯化碳⋯⋯⋯⋯⋯纤连蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．质粒⋯⋯⋯⋯⋯⋯．载体⋯⋯萤火虫荧光素酶’I’GF．Bl对月f细胞再生分化及凋r的调控作用机制T(jF，B1对肝细胞再生分化及凋11二的调控作刚机制摘要背景转化生长冈子p1被认为是典型的多功能细胞凶子，参与调节重要的细胞功能诸如增殖、分化以及组织增生、免疫等基本的生理作用。近来发现TGF—p1还有一个重要的功能，它可以抑制多种人类肿瘤的生长。对TGF．fjl敏感性的燕失据认为是肝硬化及肝癌的重要致病因素。阐释肝细胞生长与凋亡调控的分子和细

6、胞学机制，也许能为肝脏疾病的防治提供新的思路。目的本研究旨在明确正常和硬化肝细胞及肝癌细胞中TGF一91的作用及其与凋亡的关系。正常肝细胞是否比硬化肝细胞对TGF—pl诱导的凋亡更为敏感?TGF．p1是否能够诱导肝癌细胞发生凋亡?在TGF一91诱导的凋亡信号转导通路中，p53和Smad以及caspase各自扮演何种角色?方法通过50％cCL腹腔注射，用8w时问诱发BALB／c小鼠形成肝硬化模型。应用改良的胶原酶原位灌注法分离正常和肝硬化小鼠的肝细胞。利用15％的琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带来观测TGF

7、．B1诱导的凋亡。为检测TGF．p1(5n∥m1)及casp弘e诱导的凋亡，应用DNA荧光染料Hoechst33342对肝细胞核进行了染色，并在荧光显微镜下观察比较caspase一3和caspas昏8在TGF．Bl诱导的凋亡中的作用。本研究选用了三种含有不同p53基因状态的人肝癌细胞系，应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)对TGF—B1诱导的肝癌细胞的凋I∑进行了定量检测。为明确凋亡机制，对上述细胞系还进行了荧光素酶定量检测。首先应用LF2000把含有Smad结合元件和

8、荧光素酶．：!!兰△垦簦整垩璺堕堕堕：!婴塞生笙茎—————————————————．：一基阑的TGF—Bl可诱导的荧光素酶报告质粒划+细胞进彳『r转染，后经TGF—B1作用，分别检测其相对荧光素酶活性，、结果小鼠经CCL4注射后肝脏表面H{现细小结节，镜下呈现肝硬化的组织学特征。本研究建立了原代肝细胞分离培养的稳定方法。正常肝细胞予以TGF—Bl处理后，应用1．5％的琼脂糖凝胶电泳Hj‘以发现具有凋亡典型特征的梯形条带。与之