程序升温毛细管气相色谱法监测丙戊酸血药浓度的价值及临床意义

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1、程序升温毛细管气相色谱法监测丙戊酸血药浓度的价值及临床意义作者:张华年,蔡长清,李浩,徐华,刘昌林【摘要】目的:探讨一种新的更适合临床应用的丙戊酸血药浓度监测方法,评估其临床应用价值。方法:程序升温毛细管气相色谱法测定癫痫患儿血清中丙戊酸浓度,分析癫痫患儿血药浓度与临床疗效、不良反应及生活质量之间的关系。结果:331例血药浓度监测中,丙戊酸血清药物浓度位于治疗窗内236例,占71.0%,有效率93.0%;高于治疗窗45例,占14.0%,有效率91.0%;低于治疗窗50例,占15.0%,有效率12.0%。纳入不良反应评价的176例癫痫患儿丙戊酸的不良反应发生率为

2、5.7%;癫痫患儿用药依从性得到显著改善;生活质量总评分由58.1±13.1增加至68.2±10.7,差异有统计学意义。结论:程序升温毛细管气相色谱法适合于小儿癫痫药物治疗时丙戊酸血药浓度的常规监测。血药浓度监测有利于控制癫痫发作,减少药物不良反应,提高患儿生活质量,具有重要临床应用价值。【关键词】丙戊酸;癫痫;气相色谱;程序升温;生活质量10丙戊酸是儿科最常用的抗癫痫药物之一,在小儿癫痫用药中约占75%份额,可控制全身性持发性癫痫的失神、肌阵挛和强直痉挛发作,有效血药浓度范围为50~100mg/L。丙戊酸体内过程和疗效个体差异大,为临床公认的需要进行血药浓度

3、监测的品种。测定体内丙戊酸血药浓度最常用的方法为荧光偏振免疫法,该方法需用专用仪器及试剂盒,依赖进口、价格昂贵,也不能分离和排除丙戊酸代谢产物及内源性杂质的干扰,影响结果的准确性。近年来亦有采用高效液相色谱法进行测定的报道,但该方法需要进行衍生化,操作繁琐、费时,稳定性及重现性差,不适合临床常规使用。为此,我们建立了程序升温毛细管气相色谱法分离测定丙戊酸及其代谢产物,监测癫痫患儿血药浓度,指导丙戊酸临床个体化用药,提高了临床疗效,降低了药物不良反应发生及其治疗风险,提高了患儿生活质量,现介绍如下。  1材料与方法  1.1丙戊酸血清药物浓度测定[1]  1.1

4、.1仪器及试剂  GC7890Ⅱ型气相色谱仪(上海天美科学仪器有限公司),N2000双通道色谱数据工作站(浙江大学智能信息工程研究所),毛细管色谱柱(21m×0.53mm,1.0μm,中国科学院兰州化学物理研究所色谱技术研究开发中心),丙戊酸对照品(美国Sigma公司),三氯甲烷为分析纯,水为注射用水。10  1.1.2色谱条件  ATSE54石英毛细管色谱柱(21m×0.53mm,1.0μm),程序升温:初始温度60℃,维持时间5min,升温速度10℃/min,最终温度180℃,维持时间5min;柱前压0.015MPa;进样口温度130℃;检测器FID,

5、温度215℃。载气为氮气,流速18mL/min,空气流量150mL/min,氢气流量62mL/min,尾吹(氮气)10mL/min;放大器量程9,进样量2μL。血清中内源性杂质及丙戊酸代谢产物均不干扰丙戊酸的测定,丙戊酸达基线分离,保留时间为8.53min。  1.1.3样本处理及测定  精密分取血清0.5mL,置5mL离心管中,加硫酸(6mol/mL)30μL,混匀,精密加入重蒸馏三氯甲烷0.5mL,加塞密闭,于旋涡混合器上混合2min,3000r/min离心10min,分离有机层进样测定峰面积,外标法计算丙戊酸浓度。  1.1.4方法学考察  丙戊酸在20

6、~300mg/L范围内线性关系良好,最低检测浓度为110mg/L。相对回收率96%以上,日内RSD<4.3%,日间RSD<7.6%。该方法专属性强、选择性高、简便、快速、准确,适合于体内丙戊酸浓度测定。  1.2癫痫患儿血药浓度监测  1.2.1病例资料  2001年3月~2004年5年,我院门诊和住院确诊为癫痫患者331例,完全符合1981年国际抗癫痫联盟中部分性发作与全身性发作的定义。其中男206例,女125例,年龄2~16岁。丙戊酸剂量15~35mg/kg。所有血样采集时间均在稳态(连续用药4周以上),清晨谷点(服药前),抽取患者静脉血1mL

7、,3000r/min离心5min后,分离血清,采用上述方法进行测定。  1.2.2疗效评价标准  按国际通用标准,由医生、病人及家属全面评价,与用药前进行比较,按发作次数减少的百分率进行判定。(1)痊愈:发作减少100%或完全消失;(2)显效:发作减少≥75%;(3)有效:发作减少50%~75%;(4)无效:发作减少<50%。痊愈+显效+有效病例合并计算总有效率。10  1.2.3癫痫患儿生活质量评定  331例癫痫患儿中,42例经临床和脑电图检查确诊,符合特发性癫痫的诊断标准:(1)缺乏肯定的病因学线索;(2)在发病之前神经精神发育正常;(3)颅脑CT

8、和/或MRI检查无脑器质性损害的证据。

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