程序升温毛细管气相色谱法监测丙戊酸血药浓度的价值及临床意义论文

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1、程序升温毛细管气相色谱法监测丙戊酸血药浓度的价值及临床意义论文张华年，蔡长清，李浩，徐华，刘昌林【摘要】目的：探讨一种新的更适合临床应用的丙戊酸血药浓度监测方法，评估其临床应用价值。方法：程序升温毛细管气相色谱法测定癫痫患儿血清中丙戊酸浓度，分析癫痫患儿血药浓度与临床疗效、不良反应及生活质量之间的关系。结果：331例血药浓度监测中，丙戊酸血清药物浓度位于治疗窗内236例.freelg/L。丙戊酸体内过程和疗效个体差异大，为临床公认的需要进行血药浓度监测的品种。测定体内丙戊酸血药浓度最常用的方法为荧光偏振免疫法，该方法需用专用仪器及

2、试剂盒，依赖进口、价格昂贵，也不能分离和排除丙戊酸代谢产物及内源性杂质的干扰，影响结果的准确性。近年来亦有采用高效液相色谱法进行测定的报道，但该方法需要进行衍生化，操作繁琐、费时，稳定性及重现性差，不适合临床常规使用。为此，我们建立了程序升温毛细管气相色谱法分离测定丙戊酸及其代谢产物，监测癫痫患儿血药浓度，指导丙戊酸临床个体化用药，提高了临床疗效，降低了药物不良反应发生及其治疗风险，提高了患儿生活质量，现介绍如下。1材料与方法1.1丙戊酸血清药物浓度测定［1］1.1.1仪器及试剂GC7890Ⅱ型气相色谱仪（上海天美科学仪器有限公司

3、），Ｎ2000双通道色谱数据工作站（浙江大学智能信息工程研究所），毛细管色谱柱（21m×0.53mm，1.0μm，中国科学院兰州化学物理研究所色谱技术研究开发中心），丙戊酸对照品（美国Sigma公司），三氯甲烷为分析纯，水为注射用水。1.1.2色谱条件ATSE54石英毛细管色谱柱（21m×0.53mm，1.0μm），程序升温：初始温度60℃，维持时间5min，升温速度10℃/min，最终温度180℃，维持时间5min；柱前压0.015MPa；进样口温度130℃；检测器FID，温度215℃。载气为氮气，流速18mL/min，空气

4、流量150mL/min，氢气流量62mL/min，尾吹（氮气）10mL/min；放大器量程9，进样量2μL。血清中内源性杂质及丙戊酸代谢产物均不干扰丙戊酸的测定，丙戊酸达基线分离，保留时间为8.53min。1.1.3样本处理及测定精密分取血清0.5mL，置5mL离心管中，加硫酸（6mol/mL）30μL，混匀，精密加入重蒸馏三氯甲烷0.5mL，加塞密闭，于旋涡混合器上混合2min，3000r/min离心10min，分离有机层进样测定峰面积，外标法计算丙戊酸浓度。1.1.4方法学考察丙戊酸在20～300mg/L范围内线性关系良好，最

5、低检测浓度为1mg/L。相对回收率96%以上，日内RSD4.3%，日间RSD7.6%。该方法专属性强、选择性高、简便、快速、准确，适合于体内丙戊酸浓度测定。1.2癫痫患儿血药浓度监测1.2.1病例资料2001年3月～2004年5年，我院门诊和住院确诊为癫痫患者331例，完全符合1981年国际抗癫痫联盟中部分性发作与全身性发作的定义。其中男206例，女125例，年龄2～16岁。丙戊酸剂量15～35mg/kg。所有血样采集时间均在稳态（连续用药4周以上），清晨谷点（服药前），抽取患者静脉血1mL，3000r/min离心5min后，分离

6、血清，采用上述方法进行测定。1.2.2疗效评价标准按国际通用标准，由医生、病人及家属全面评价，与用药前进行比较，按发作次数减少的百分率进行判定。（1）痊愈：发作减少100%或完全消失；（2）显效：发作减少≥75%；（3）有效：发作减少50%～75%；（4）无效：发作减少50%。痊愈+显效+有效病例合并计算总有效率。1.2.3癫痫患儿生活质量评定331例癫痫患儿中，42例经临床和脑电图检查确诊，符合特发性癫痫的诊断标准：（1）缺乏肯定的病因学线索；（2）在发病之前神经精神发育正常；（3）颅脑CT和/或MRI检查无脑器质性损害的证据。

7、其中男29例，女13例，年龄8～12岁，平均10岁3个月，病程平均2年5个月。参照CramerJA等［2］癫痫患者生活质量专用量表，结合患儿生活质量特点加以修订，本量表由患儿及家长自评、情绪、社会功能、对发作担忧、药物副作用、认知功能、精力7个分项，每个分项包括2～6个问题由被试者解答，各分项评分以T分值表示，综合分项T分值得出生活质量总分值，分值越高，生活质量越高。以癫痫患儿自身为对照，在开始治疗药物监测前及开始监测6个月后，分别评定癫痫患儿生活质量。采用非参数统计比较血药浓度监测前后各分项及生活质量总评分的统计学差异。2结果2

8、.1癫痫患儿血药浓度与临床疗效之间的关系结果见表1。丙戊酸血清药物浓度治疗窗内（40～100μg/mL）236例，占71.3%，与采用荧光偏振免疫测得结果75.2%较接近［2］。表1癫痫患儿血药浓度监测结果与临床疗效关系（略）2.2血药浓度监测对丙