经尾静脉移植骨髓间充质干细胞治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的实验研究

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1、分类号：R743密级：学位类别：科学学位口专业学位团硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION学校代码：10062学号：2010602738学科门类：医学又坪鲁耕囊鼍论文题目：经尾静脉移植骨髓间充质干细胞治疗大鼠脑TITLE缺血再灌注损伤的实验研究Intravenousbonemarrow—derivedmesenchymalstemcellsforthetreatmentofischemia-reperfusioninjuryinrats一级学科：临床医学二级学科：神经病学论文作者：王雅静指导教师：王新平教授导师组成员：阎晓玲

2、苏心巫嘉陵王世民天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：兰确嘲日期：2013年5月28日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印

3、或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密回。(请在相对应的方框内打“4”)学位论文作者签名：圣塑垄盔鱼日期：2013年5月28日导师签名：!塾重日期：2013年5月28日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：探讨经尾静脉移植骨髓间充质干细胞(bonemarrow．derivedmesenchymalstemcells，BMSCs)对治疗脑缺血再灌注损伤大鼠的有效性及安全性，并探讨其可能的机制。方法：1．取SD大鼠长骨骨髓作为供体来

4、源，经密度梯度离心法和组织贴壁筛选法进行体外培养并纯化BMSCs，经细胞形态、表面标记物等特性鉴定证实获得的细胞为BMSC。移植前以lOmg／L的BrdU进行标记；2．线栓法制作SD雄性大鼠MCAO模型，TTC染色鉴定MCAO模型；3．根据ZeaLonga神经功能缺损评分将符合标准的62只脑缺血MCAO大鼠随机分为3组：①A组：在模型建立后7d，通过尾静脉将3×10．6个BMSCs移植入大鼠体内②B组：在模型建立后7d，通过尾静脉将1×10,6个BMSCs移植入大鼠体内③C组不作处理。4．①改良神经损伤严重程度评分(modifiedneu

5、rologicalseverityscores，mNSS)：于大鼠移植前、移植后第3、7、14、21、28d进行mNSS评分评估神经功能恢复情况。@Morris水迷宫训练及测试：于移植后第14、28d测试大鼠学习和记忆能力。5．移植后第7、14、30天处死大鼠，取大鼠脑组织行免疫组织化学染色观察CDllb、MPO阳性细胞；BrdU单染标记移植的BMSCs；单染标记的脑源性神经营养因子(BDNF)；Brdu和MAP一2双染标记BMSCs分化的神经元样细胞；Brdu和GFAP双染标记BMSCs分化的神经胶质样细胞；BrdU和vWF双染标记增殖

6、的血管内皮细胞；Brdu和VEGF双染标记BMSCs分泌的促血管增生因子。结果：1．经密度梯度离心法和组织贴壁筛选法进行体外培养并纯化BMSCs，培养第3代的MSCs经流式细胞仪检测，表达CD90、CD71阳性率为99．74％、98．93％，表达CD45、CD34、CDl4阳性率为0．36％、0．32％、0．45％，说明这一细胞群大部分处于未分化干细胞状态，并具有对塑料底物的贴附特性，符合BMSCs的特点，说明是分离培养纯度较高的BMSCs；2．用改良线栓法制作MCAO模型后，大鼠神经功能缺损明显；结合TTC染色检测缺血侧的脑实质呈苍白色

7、，证实造模成功。3．MCAO模型后经尾静脉移植BMSCs，A组和C组比较，行为学恢复更为明显，(P0。05)；A组大鼠逃避潜伏期(24．53士19．093s)较C组(35．64133．901s)缩短(P<0．05)，A组跨越平台次数(4．60士1．506)，较C组大鼠(2．44士0．882)明显增多(P

8、du单染阳性细胞及Brdu+MAP一2、Brdu+GFAP、Brdu+vWF、Brdu+VEGF免疫组织化学双染阳性细胞。结论：1．BMSCs可以在体外分离、传代、扩增；2．采用改良线栓法制作