DK1敲除致小鼠猝死机制的研究

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1、PDK1敲除致小鼠猝死机制的研究硕士研究生：杜为刘榜霞导师：曹克将教授汪道武教授内容研究背景立项依据技术路线实验方案可行性分析课题进展研究背景PDK1即3磷酸肌醇依赖蛋白激酶-1PDK1激酶，属于AGC家族，恰恰也是最常见的磷酸化激活AGC激酶的一个AGC激酶。PDK1在心血管方面主要参与调控心脏发育，纤维化及重构等方面发挥重要作用PI3-K通过影响PDK1及控制PIP3的合成来发挥生理功能。■细胞内PIP3的生理效应＠调控细胞的活力和增殖以及糖代谢＠参与蛋白的合成和细胞的生长＠调节离子的转运和激素的释放，神经兴奋性，细胞增殖和凋亡方面

2、发挥着重要作用血清糖皮质激素诱导的蛋白激酶的亚型＠控制细胞的存活、增殖、生长、迁移PDK1/PIK-3信号转导通路TheFASEBJournal.September25,2012立项依据关于PDK1基因敲除小鼠猝死相关发生机制及其相关电生理改变还未有报道。PDK1基因敲除小鼠模型据已有研究表明，该基因敲除后胚胎小鼠表现为心脏发育不良，出生后敲除后一般数周即可发展为扩张型心肌病。PNASMay26,2009Vol.106No.218689-8694★PDK1信号通路在调控心肌细胞生存和防止心衰方面发挥着重要作用。★PI3K下游的信号通路的失调与

3、多种离子通道的异常有关。如SGK1/3、FoxO1等PNASMay26,2009Vol.106No.218689-8694PDK1-SGK1/3CardiovascularResearch57(2003)1079–1084PI3-K/PIP3L-CalciumCurrentCirculation.2009;120:318-325NATURENEUROSCIENCEVOLUME7

4、NUMBER9

5、SEPTEMBER2004TheAmericanJournalofPathology,Vol.175,No.3,September2009Scien

6、cetranslationalmedicine25April2012Vol4Issue131PDK1-PI3-K/FoxO12012ACC/AHA大会论文未发表PI3K激活可以使钠电流幅度增高，而foxO1敲除钠电流幅度同样增高，目前已知PI3K的激活可以抑制foxO1，因此二者可能存在某些联系1.PDK1敲除导致扩心病，电生理改变未知2.SGK1/3的敲除电生理发生改变，但心脏是否改变未知3.PI3K-PIP3敲除发生扩心病、电生理发生改变4.foxO1敲除电生理发生改变，但心脏结构是否发生改变未知，但与PI3K-PIP3关系确定心脏结构变

7、化（扩心病）离子通道的改变PDK1敲除是未知PDK-SGK1/3敲除未知是PI3K敲除是是PDK1-foxO1敲除未知是因此，PDK1敲除发生扩心病最终导致敲除基因小鼠猝死可能性的机制是PDK1-PI3K/PIP3，且可能发生QT间期变化，钠电流或晚钠电流增大或钙电流减小技术路线DCMHFpdk1敲除小鼠death?泵衰竭NaKCa技术路线心脏PDK1基因特异性敲除鼠模型的建立（南大模式动物研究所负责：已完成）在8W时将其处死，对其进行研究功能研究结构研究机制研究超生心动图心电图膜片钳技术Westernblot组织病理血生化实验方案＠普通心电

8、图＠动态心电图＠膜片钳技术＠组织病理＠Westernblot膜片钳技术离体心脏的获取心脏灌流及原代心肌细胞悬液制备存活心肌细胞膜片钳测量数据整理与分析Clamppatch小鼠心室肌细胞灌流原理图：（Langendorff法）远期计划1、第一阶段完成野生（C57bl6品系）小鼠正常心室肌细胞IL-Ca和Ito的测量取样。2、第二阶段等待仪器和敲除鼠准备妥善后，开始正式试验。3、第三阶段分析数据，撰写论文。Thankyouforyourattention!JloB(2bMtcgD+*nU)BdHrygGcq5qXtGZ%xO24Jv86#Mu7)

9、RFL3*SVDu4##yYxDD+y!QqPB90QFTrD&8LtS5LB5a2Cj6+oNoJj8)-jPuvQ5xjZomx6L((ikQqaDd8b7PS1$WPwt!!lcjgqvabT)xa$pLqnfvJ0aHx2*h0KZIBPLn09qZ0IojbZS-akRhsnYWOLPDl%sYcTjuc$K0#w8FGB933Nv1KMT9&MYIRpEaZF0R)3R7Qg(Kusdf80onSerYxvTt8CBfojMx$%LJ+0)KhefCq6D9Mur6k8mktM7bM4f#qMLY(lYM8)4v+vHOuTr8g

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