hemogen敲除对小鼠应激造血功能的影响研究

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1、＠乂漆乂審伊ＴＩＡＮＪＩＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ中国第－所现代大学ｍＦＯＵＮＤＥＤＩＮ１８９５ＪＫ．Ｘｕ＾ＷｍＭＪ硕±学位论＾ｈＨ学科专业：制药工程ＨＨ：作者姓名：潘婷婷ｊ杨咖教授指导教师；３■ｍ２０巧年５月ｊＰｙｉｐｉ—，－■／■独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研巧成果，除了文中特别加标注和致谢之处外，论文中不毎含其他人已经发表或撰写过的研巧成果，也不包含为获得天津大学或其他教育机构的学位或

2、证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研巧所做的任何贡献巧己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：成壹签字日期：年＾月学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津大学有关保留。、使用学位论文的规定特段权天津大学可将学位论文的全部或部分巧容编入有关数据库进斤检索。同意学校．并采用影印、缩巧或扫描等复制手段保存、汇编ｔｕ共查阅和借阅向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘。（保密的学位论文在解密后运巧本授权说明）学位论文作者签名：劝么导师签名＾签宇曰期：＞１主

3、年月）ｒ曰签字曰期：灿年＾月义ｒ曰Hemogen敲除对小鼠应激造血功能的影响研究StudyonRolesofHemogeninStressHematopoiesisinMice专业：制药工程作者姓名：潘婷婷指导教师：杨晓明教授天津大学化工学院二零一五年五月摘要EDAG(红系分化相关基因)是在造血组织中特异性表达的转录调节因子，前期研究表明人EDAG可促进造血细胞增殖，抑制凋亡，调控造血细胞分化。Hemogen为人EDAG在小鼠中的同源基因，实验室前期利用锌指核酸酶技术（ZFNs）构建了Hemogen敲除小鼠模型并对其表

4、型进行了分析，结果显示Hemogen并不影响小鼠正常生理条件下的造血系统发育。本论文探讨了应激条件下Hemogen对造血功能的调控作用。造血干细胞的一个标志特征是移植后受体的造血重建。在本文中我们利用5-FU处理的全骨髓移植实验，5-FU未处理的全骨髓移植实验检测Hemogen对HSC体内造血重建功能的影响；利用归巢实验检测Hemogen缺失对HSC的归巢能力的影响；利用反向移植实验检测Hemogen缺失对造血微环境的影响。5-FU处理的全骨髓移植实验结果表明敲除型嵌合受体小鼠的造血重建能力明显降低；且随着供体细胞浓度的增加

5、，野生型嵌合受体基本全部实现重建，但敲除型嵌合受体小鼠的造血重建能力并没有得到明显提高；供体采用5-氟尿嘧啶未处理的骨髓细胞进行移植实验，结果表明敲除型嵌合受体小鼠仍然未能重建，表明Hemgon敲除可导致HSC体内造血重建能力明显降低；归巢实验表明Hemogen缺失不会影响HSC的归巢能力；反向骨髓移植实验中野生型嵌合受体基本实现全部重建，敲除型嵌合受体小鼠重建率尽管比正向移植的重建率高，但仍然明显低于野生型小鼠，表明造血微环境可能也参与了Hemogen对造血重建的调控作用。我们还评价了Hemogen敲除小鼠对辐射的敏感性。

6、对致死剂量辐射小鼠进行骨髓移植，结果显示源于野生型小鼠的骨髓移植显著提高致死剂量辐射小鼠存活率，而源于敲除型小鼠的骨髓移植未能有效提高小鼠存活率，表明Hemogen在骨髓造血重建中发挥关键作用。此外，对Hemogen敲除小鼠对低剂量照射敏感性进行了较为深入的研究。结果表明在小鼠连续7天低剂量辐射后，敲除小鼠白细胞明显减少且主要为淋巴细胞的减少，照射后敲除小鼠骨髓细胞集落形成能力降低，DNA损伤增加，表明Hemogen敲除小鼠对低剂量辐射损伤更加敏感。综上，我们发现Hemogen敲除可导致小鼠在应激条件下造血重建能力降低，对放

7、射敏感性增加，提示Hemogen是调控应激造血的关键转录因子。关键词：Hemogen；应激造血；骨髓移植；辐射敏感性ABSTRACTEDAGisahematopoietictissue-specifictranscriptionregulatorandinvolvedinhematopoieticcellproliferation,differentiation,andapoptosis.HemogenisthehomologousgeneofEDAGinmice.PreviouslywegeneratedHemogen-/

8、-miceusingZincfingernucleasetechnology(ZFNs)andfoundthatHemogen-/-miceshowednormalhematopoiesisandlineagecommitmentunderphysiologicalconditions.I