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《四物汤对辐射小鼠造血功能影响的初步探讨》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、216中国中医药科技2002年第9卷第4期四物汤对辐射小鼠造血功能影响的初步探讨路晓钦高月刘永学谭洪玲马增春(军事医学科学院放射医学研究所药理毒理研究室北京100850)摘要目的:对察四物汤对35Gy射线照射小鼠造血系统的影响,探讨四物汤作用机制。方法:通过外周血象观察、造血祖细胞体外培养、MTT法检测四物汤及其拆方诱导NIH3T3细胞上清对G-CSF依赖细胞株NFS-60增殖等指标的影响研究四物汤的作用机制。结果:四物汤显著升高35Gy射线照射小鼠外周血白细胞、血小板,促进其造血祖细胞CFU-G
2、M、CFU-meg、CFU-mix集落的增殖;四物汤诱导的NIH3T3细胞上清能显著促进G-CSF依赖细胞株NFS-60细胞的增殖。结论:四物汤对辐射小鼠造血细胞的作用机制与刺激NIH3T3细胞产生类G-CSF作用或与G-CSF产生协同作用而促进外周血白细胞、血小板恢复有关。主题词血虚/中医药疗法四物汤/治疗应用辐射损伤造血系统/药物作用小鼠四物汤由熟地Radixrehmanniae、当归Radixangelicae2实验方法sinensis、白芍Radixpaeoniaealba、川芎Rhizomachuanxiong组2
3、1外周血象检测各组动物(按体重及外周血象随机分成,具有增强免疫、活血补血等功效,临床上应用广泛。近年组,每组10只)分别于制模前、制模后1、3、5、7、9、11、13、17、来,国内外学者对四物汤对辐射引起的造血系统的影响进行21d,每只实验小鼠尾静脉取血20l,用Sysmex-800自动血[1~3]了初步的研究。但对四物汤在射线照射小鼠造血系统球计数仪检测外周血象。方面的作用机制研究不足,本文观察了四物汤对照射小鼠造22造血祖细胞培养照射后第7d,各批次活杀3只小鼠,血的影响并对其作用机理作了初步探讨。无菌条件下取股骨,用R
4、PMI1640培养液冲出骨髓细胞,过41实验材料号针头制成单细胞悬液,计数有核细胞,并计算出接种细胞511实验动物分组C57BL/6J小鼠,6~8周龄,体重20悬液量,使其于培养体系中的有核细胞浓度为110/ml。[4]2g,雌性;由军事医学科学院实验动物中心提供,一级动物饲参照刘秀珍介绍的方法并稍加改动,检测粒系(CFU-养室饲养。将小鼠按体重随机分为3组:正常对照组、模型GM)、巨核系(CFU-meg)祖细胞集落。60组、四物汤组。小鼠常规饲养3~5d后,Co射线全身一次23NFS-60细胞生长曲线的测定将指数生长期
5、的NFS照射,治疗组照后立即灌胃给药,连续7d,每d1次,02ml/次-60细胞用RPMI1640培养液洗涤3次,血球计数仪计数细(相当于四物汤10g/kg),正常对照组和模型组则给予等体积胞,然后用含5%胎牛血清的RPMI1640培养基调整NFS-608的生理盐水。细胞浓度为810/ml,每孔50l加入96孔板中;G-CSF因12主要试剂与仪器RPMI1640,GibcoBRL公司产品;胎牛子以上述培养基3倍递减稀释后,每孔加50l,每组做6个复血清,马血清,北京军区兽医防治中心提供;G-CSF,日本麒孔,在37,5%CO
6、2孵箱中培养2d,培养终止前4h加入MTT麟株氏会社产品;CO2培养箱,Napco-5410;酶标仪,Wal(5mg/ml)20l,在37,5%CO2孵箱中继续培养4h后弃上lacVicToR1420,美国产品;自动血球计数仪(日本Sysmex-清,加入200lDMSO,振荡助溶,在酶标仪上置490nm波长处800);CO2孵育箱;倒置相差显微镜(AO公司生产);剂量辐测OD值。以造血因子浓度为横坐标,以OD值为纵坐标绘射检测控制仪(军事医学科学院QT-3型优质OCL)。制生长曲线。13药物及制备四物汤全部药物均购自北京同仁
7、堂中药24四物汤及其拆方条件培养液的制备及对NFS-60细胞厂。按太平惠民和剂局方规定的剂量称取,熟地15g、当归增殖影响的测定计数指数生长期NIH3T3细胞,加入四物410g、白芍10g、川芎6g,共计41g,经水煎、过滤、浓缩、配制成汤并用培养液调整细胞浓度为510/ml、药物终浓度分别100%药液(即每ml药液含生药1g);其它拆方组均按相当于为32、16、8、4、2、1、05、0mg/ml,置培养瓶中;在375%CO2四物汤的量进行拆方分组,按同样的方法制备成相当于四物孵箱中培养3d,取上清备用;将指数生长期的NFS
8、-60细胞汤浓度的药液,置4保存备用。体外实验将过滤除菌的四用RPMI1640培养液洗涤3次,计数并用含5%胎牛血清的6物汤药液倍比稀释成不同浓度,加入到细胞培养体系中。RPM
