氧自由基在慢性胰腺炎发病机制中的作用及抗氧化剂治疗

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1、上海第二医科大学硕士学位论文氧自由基在慢性胰腺炎发病机制中的作用及抗氧化剂治疗姓名：朱颖申请学位级别：硕士专业：内科学（消化系病）指导教师：袁耀宗2003.4.1氧自由基在慢性胰腺炎发病机制中的作用及抗氧化剂治疗中文摘要目的：通过对大鼠胰腺长期的氧化刺激建立大鼠慢性胰腺炎的动物模烈。研究氧自由基在慢性胰腺炎发瘸机制中的作用，并在此基础上探索抗氧化剂对慢性胰腺炎的治疗作用。方法：1．建立动物模型：DETC(=乙魅=硫代氨基甲酸盐，Diethyldithiocarbamate)法采用雄性Wistar大鼠60只，分为对照组(n_30)和DETC模型组(n_30)。DETC模壅组每周两次在大瓯

2、睃膜内注射DETC，剂量为750mg／kg，对照缀注射垒瑾魏承。在2w，3w，知，5w，6w，8w对处死大鼠。TNBS(三磷藿苯磺酸，trinitrobenenzesulfonicacid)法浆雳雄洼SD大鬣48只，分为燕常怼照缀(拶8)，缀手术缝(珏_2e>，TNBS模麓缓(轳20)，TNBS模型组在大藏胰篱内注入会2％TNBS鄹10％酒壤的磷酸缓{孛盐溶渡(PBS)，假手术组注入不含TNBS的lO％滔精磷酸缓冲盐溶液。2w，4w，6w，8w时处死大鼠，邋过兔疫缀化的方法检测胰腺组织内a一平滑肌肌动凝白(泓smoothmuscleactin，伐．SMA)，结蛋白(Desmin)，胶原

3、I(CollagenI，coI)，胶原III(CollagenIII，CoIII)，转化生长因子Bl，2(TransformingGrowthFactor．13l巾TGF．DL2)，纤维连接蛋臼(Fibroneetin，FN)的表达。通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-B1mRNA和FNmRNA在胰腺组织内豹表达。2．抗氧化治疗：248强雄髋Wistar大鼠分为正常对照组(n-8)，慢性胰豫炎模整缎(n=120)和治疗组(n=120)。穰垄组分为三组，每周两次在大鼠簇控内注射DETC，裁鬟分裂秀500meflkg，750mg／kg或1000mg／kg。治疗缝氇分淹三维，没

4、瓣750mg／kg瓣DETC及15mg／kg维生索E(VitE)，15mg／kg维生素C(VitC)或lOOmg／kg哩氨啦嗡二酸代缀基帮酸鼓(PyrrolidineDerivativeofDithiocarbamate，PDTC)。正嚣对照组不做任何处理。每组每时间点备取5只大鼠，转别在90m，24h，48h，72h，2w，3w，4w，6w时盘b死，检测胰腺组织中SOD，GSH．PX活性和MDA的含量，后4个时间点通过免疫组化的方法检测胰腺组织仪．SMA，Desmin，CoI，coIII，TGF·Bl巾FN的表达，通过RT-PCR检测TGF．131mRNA和FNmRNA在胰腺组织内的

5、表达。结果：DETC组和TNBS组大鼠在3-4w后出现胰腺的纤维化，免疫组化方法示胰腺组织内CoI，CollI，FN，Ⅸ．SMA，Desmin，TGF．13l，2呈阳性表达，通过RT—PCR可见TGF．BlmRNA和FNmRNA阳性表达。在大鼠腹膜内注入DETC后很快引起胰腺组织SOD下降，MDA升高，GSH—PX减少，胰腺出现水肿、空泡样变等病理变化，而对肝、肾、脾影响较小。用抗氧化剂干预治疗后，胰腺SOD，GSH．PX下降和MDA增多均不如模型组明显。DETC模型组大鼠3w后开始出现较为明显的小叶间及小叶内纤维化并伴炎性细胞浸润，6w左右纤维化达到高峰，腺体萎缩及小叶结构破坏明显，

6、与正常对照组相比有显著差异(P<0．001)。VitC，VitE和PDTC治疗组的胰腺组织水肿明显，但整个腺体的炎症和纤维化明显好转，也未见腺体萎缩和破坏。三组治疗组与模型组病理改变均有显著性差异(P<0．001)，而三种治疗药物之间无显著性差异(P>0．05)。通过免疫组化方法可见治疗后胰腺组织CoI，CoIII，FN，or．-SMA，Desmin，TGF．13I在组织内表达减弱，CoI，CoIII，FN尤为明显。通过RT．PCR检测发现TGF．BlmRNA和FNmRNA在模型组胰腺组织内表达增强，治疗组中两者的表达较模型组有所减弱，但仍高于正常对照组(P

7、方法均能成功诱导大鼠慢性胰腺炎，相比之下DETC法操作更为简单，基于其造模原理，更有利于研究氧自由基在慢性胰腺炎中的作用。2．氧自由基可能在大鼠慢性胰腺炎发病机制中起着重要作用。3．抗氧化剂可以有效她抑制大鼠胰腺纤维化，为今后运用抗氧化剂治疗慢性胰腺炎提供了实验依据。关键词：慢性胰腺炎；纤维化；氧自由基；抗氧化剂2ThestudyonChronicPancreatitis--theRoleofFreeRadicalsinthePathogene