苦鬼臼毒酮对HL60细胞增殖、凋亡及端粒酶活性影响的实验研究

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1、兰州医学院硕士学位论文苦鬼臼毒酮对HL-60细胞增殖、凋亡及端粒酶活性影响的实验研究姓名：吴志豪申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：李文惠2002.5.1苦鬼臼毒酮对HL．60细胞增殖调亡及端粒酶活性影响的实验研究中文摘要目的观察苦鬼臼毒酮(picrop甜ophyllotoxone)对人白血病细胞HL一60的增殖、凋亡及其端粒酶活性的影响。方法采用光镜、荧光显微镜、电镜观察苦鬼臼毒酮作用FIL．60细胞后的细胞形态，DNA琼脂糖凝胶电泳观察凋亡特征DNA梯带，MTT法、克隆形成法和流式细胞仪检测增殖抑制和凋亡程度，RT．PCR法检测凋亡相关基因bcl．2和caspase．

2、3的表达，TRAP．ELISA法测『。定端粒酶活性。结?t‘果，(1)3．3×io-7．1．O×t0-4M的苦鬼臼毒酮对}玎j枷细胞的增殖有抑制作用(p<0．01)，且随药物浓度增加而增加。48h药物对HL．60增殖的抑制作用最强，24h和72h的增殖抑制作用接近。(2)苦鬼臼毒酮有诱导HL．60细胞凋亡的作用，最佳诱导凋亡浓度在33×104M附近(p<0．01)，48h诱导凋亡作用最太。、(3)苦鬼臼毒酮作用HL．60细胞后下调bcl．2的表达及轻微上调caspase．3的表达。(4)苦鬼臼毒酮使HL．60细胞端粒酶活性下降，但不明显。结论苦鬼臼毒酮有抗肿瘤作用，主要是通过对HL-60细

3、胞的细胞毒作用和诱导凋亡作用来实现。其诱导凋亡与下调bel．2和上调caspase．3的表达有关。关键词苦鬼臼毒酮：HI．．60；增殖；凋亡；端粒酶；bcl．2；caspase．3AnExperimentalStudyabouttheEffectsofPicropodophyllotoxoneonProlifemtion,ApoptosisandTelomeraseActivityofHL-60CellAbstractObjectiveTostudytheeffectsofpicropodophyllotoxoneonproliferation，apoptosisandtelomerase

4、activityofilL-60celllineMethodsTheproliferationinhibitioneffectwasassessedwithMTTcolorimeticassayandanalyticalassayofcellclone．TheapoptosiswasobservedbycellmorphologywithlightmicroscopeandelectromicroscopeandDNAladderonagarosegelafterelectrophoresis．TherelationofcellcycleandapoptosisWasmeasuredwit

5、hflowcytometerThelevelofmRNAofbcl-2andcaspase-3wasshowedonagarosegelthroughelectrophoresisafterRT-PCR．ThetelomeraseactivityWasdetectedwithTRAP-ELISAassayResults(1)Picropodophyllotoxoneinhibitsproliferation(p<0．01)ofHL．60cellfrom3．3×10。7Mto1．OX104M，theinhibitionrateriseswiththeconcentrationincreasi

6、ng．amongthethreeinhibitionrate2of24h，48hand72h，48h’Sisthehi曲est，and24h’Siscloseto72h’S(2)PicropodophyllotoxoneinducesapoptosisHL一60cell，amongthethreeconcentration，3．3×10。6Minducesapoptosisinhighestrate(p<0．01)，andthethreedays，theapoptosisrate48histhehighest(3)Picropodophyllotoxonedown—regulatesthe

7、expressionbcl．2andsli曲tlyup—regulatescaspase-3ilL-60cell(4)PicropodophyUotoxoneslightlydecreasestelomeraseactivity．ofilL一60cellConclusionsThroughcytotoxicationandapoptosisinducingonHL．60cell，picropodophyllotoxone