hbx蛋白对正常肝细胞增殖及端粒酶活性的影响

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1、分类号：R731．31密级：单位代码：10114学号：200930626HBx蛋白对正常肝细胞增殖及端粒酶活性的影响研究生：贺赶翅：指导教师：邳蠢堡数援申请学位门类级别：医堂亟±!型堂堂焦2专业名称：凼型堂研究方向：压疸的基因渔痘所在学院：笠三!晦废医堂瞳2012年5月1O日学位论文独创性声明lIIllllllllllIIIlllIIIIIRillIIIIIIlY2126505本人声明，所呈交的学位论文系在导师邓志华教授指导下本文独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意

2、义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：1、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开道歉。4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：笪墨盟学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或

3、机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：挝壹指导教师签名：翌妇日期：竺!三年』二月三L日日期：丝!兰年!二月丑日(本声明的版权归山西医科大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用)目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．I英文

4、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．Ⅲ英文缩略语表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．V正文⋯⋯⋯．一⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1丽舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．2结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．13讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．16结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．18附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．19参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．24综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26个人简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3l致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．32山西医科大学硕士学位论文HBx蛋白对正常肝细胞增殖及端粒酶活性的影响摘要研究背景：大量的流行病学调查显示，乙肝病毒(HBV)的慢性感染与肝细胞癌的发生有密切的关系，HBV慢性感染是肝细胞癌发生的主要危险因素之一，然而，HBV引起肝癌的机制尚不是十分清楚，随着对肝细胞癌和HBV研究的不断深入，许多学者发现HBV中的x基因及其表达产物HBX蛋白在HBV相关性肝细胞癌的形成中起重要的作用。HBV基因组由4个开放读

6、码框(ORF)组成，一x基因是其中最小的一个ORF，它编码的HBX蛋白由145．154个氨基酸组成，分子量约为17kDa，HBX蛋白是一种多功能的调节蛋白，参与调节细胞的增殖与凋亡、细胞周期、基因转录和细胞信号转导等方面，从而作用于肝细胞癌的发生发展。肝癌细胞的无限增殖是肝癌难以控制的主要原因之一，而端粒酶的激活是细胞无限增殖的的基础。研究HBX蛋白对正常肝细胞的转化作用及其对端粒酶活性的影响具有重要的意义，可能为基于端粒酶的肝癌治疗提供新的思路。目的：观察乙型肝炎病毒X蛋白(HBX蛋白)对L02肝细胞的形态及增殖能力的

7、影响，以及HBX蛋白对L02细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达、端粒酶活性的影响。方法：1．体外培养人正常肝细胞L02；2．构建PEGFP-N1．HBX质粒；3．脂质体LipofectamineTM2000介导PEGFP．N1．HBX质粒、PEGFP-N1质粒稳定转染L02细胞；4．倒置荧光显微镜观察稳定转染后细胞中EGFP的表达；5．Westernblotting检测稳定转染后L02细胞中HBX蛋白的表达；6．电子显微镜观察稳定转染后L02细胞的形态变化；7．MTT法检测HBX蛋白对L02细胞增殖速度的影响

8、；8．RT．PCR法检测HBX蛋白对L02细胞hTERTmRNA表达的影响；9．TRAP．PCR银染法检测HBX蛋白对L02细胞端粒酶活性的影响。结果：1．成功构建了稳定表达HBVX基因的PEGFP-N1．HBX重组质粒。2．稳定转染PEGFP-N1．HBX质粒和PEGFP-N1质粒的L02细胞均有EGFP荧光表达，