hbx对肝细胞hmgb1表达的影响

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1、中图分类号垦三!UDC鱼lQ硕士学位论文学校代码!Q§量三密级公珏HBx对肝细胞HMGBl表达的影响TheinnuenceofHBxtoHMGB1inliVerceUs作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：副指导老师：李佳临床医学内科学(感染病科)湘雅医院范学工教授李宁副教授论文答辩日期2旦，缉蜩必B答辩委员会主席2鲤一中南大学2013年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究

2、成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：签筵。日期：趟f兰年j二月苴日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：丝导

3、师签名日期：业年上月趣曰HBX对肝细胞HMGBl表达的影响摘要目的：构建表达船x的HBx．pcDNA3．1质粒，观察船X对删GBl的表达的影响；并筛选出能有效抑制HMGBl表达的小干扰RNA，为探索船x、HMGBl的相互关系奠定实验基础。方法：从HepG22．15细胞扩增出野生型HBX基因片段并连接到pcDNA3．1载体质粒，将质粒转染到两种不同的肝细胞株(H印G2、L02细胞)，用G418筛选稳定表达HBx的细胞，观察瞬时转染48小时后及稳定表达瑚x的细胞系中删GBl的蛋白表达水平。用Lip02000脂质体将三种下调删GB1表达

4、的小干扰RNA(si．RNA)转入HepG22．15细胞，筛选出干扰蹦GBl表达最有效的一种，为进一步研究做准备。结果：皿X基因瞬时转染48小时后，HepG2及L02细胞中蹦GBl表达均明显上升；稳定细胞系HepG2．船x建系一个月后，蹦GBl表达水平仍较阴性质粒对照组高：稳定细胞系L02．册x建系若干年后，删GBl表达水平较空白质粒对照组表达下调。成功筛选出有效干扰ⅧⅥGBl表达的si．I心A。结论：成功构建了耶x表达质粒，皿X基因可上调蹦GBl的表达。关键词：HBV；HBx蛋白：删GBl；肝癌TheinnuenceofHBXt

5、oHMGBlinlivercellsAbstractObjective：Inordert0investigatemepotentialrelationShipofHBx●proteinaIldHMGB1，whicharecloselyrelatedtoHCCrespectiVely，weconstmctHBx-pcDNA3．1plasmidSandtr龇sf-ectthemintotwodifferentlivercenlines，todetectt11epr税einleVelofHMGB1．Inaddition，weselect

6、asi．RNAw11ichcallknockdowntheeXpressionofHMGB1effectivelytofhnherStudymeinteractionofHBxproteinand删GBl．Method：We锄pli母theHBxgene6．omHepG22．15cell1ineaIldco皿ectittoplasmidpcDNA3．1．Thenwet舢sfecttheconstmctedplasmidintoHepG2a11dL02cellsanduse(抖18toselectthecellswhichcaIls

7、tablyeXpressHBxprotein，toimitatemeacutea11dc11ronicinfectionofHBVXgene．Detectionoftheprotein1eVerofHMGB1inbothtransienttransfectionaJldstable住ansfectioncellsarefollowed．haddition，weuseLipofect锄ineTM2000totmsfect衄eesi-RNAswhichcanknockdowntheexpressionofHMGB1intoH印G22．

8、15cellstoselectthemostefjf’ectiveone，getpreparedfor缸恤erstudyoftheinteractionof}玎3xand}MGB1．RksuIts：Thereisanup．regulationofm