虎纹毒素Ⅰ对全脑缺血再灌大鼠海马TNF凋亡通路的影响

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1、湖南师范大学硕士学位论文虎纹毒素-Ⅰ对全脑缺血再灌大鼠海马TNF凋亡通路的影响姓名：王一蓉申请学位级别：硕士专业：运动人体科学指导教师：陈嘉勤20070501摘要研究目的：观察虎纹捕鸟蜘蛛毒素(虎纹毒素一I，HWTX—I)对大鼠全脑缺血再灌注损伤海马组织肿瘤坏死因子(TNF)死亡受体凋亡通路中相关因子蛋白及基因表达的影响，探讨I-IWTX—I对大鼠全脑缺血再灌注损伤模型神经细胞保护作用的可能分子机制，为颅脑损伤临床治疗新的治疗手段提供实验依据。研究方法：5—6周龄健康雄性SD大鼠48只，随机分为假手术组(n=16)、非用

2、药组(n=16)、用药组(n=16)，采用改良的Pulsinelli大鼠四血管阻断全脑缺血结合蛛网膜下腔置管模型，应用光镜、电镜、免疫组化、逆转录一多聚酶链式反应(RT—PCR)实验技术，观察HwrX-I对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马CAl区锥体细胞Nissl染色形态学变化、胞内线粒体超微结构及对海马组织中TNFa(肿瘤坏死因子a)、TNFRI(肿瘤坏死因子受体I)、TRADD(TNF相关死亡结构域)、FADD(Fas相关死亡结构域)、Caspase8等TNF死亡受体凋亡通路相关因子蛋白及基因表达的影响。研究结果：(1)通

3、过Nissl染色光镜下观察到假手术组SD大鼠海马CAl区可见数层锥体神经元，排列整齐紧密；非用药组海马锥体细胞排列散乱，层次不完整，呈稀疏分布；而用药组海马锥体细胞略为疏散分布。(2)电镜下观察到假手术组海马锥体细胞线粒体嵴清晰可见，未见其断裂现象；非用药组线粒体嵴模糊不清，出现空泡化现象；而用药组未见明显线粒体嵴断裂现象。(3)应用免疫组织化学染色法观察到假手术组海马CAl区几乎未见TNFa、TNFRI、TRADD、FADD、Caspase8凋亡因子阳性细胞(阳性细胞为棕褐色)表达或仅见少量阳性细胞表达；非用药组海马C

4、Al区可见阳性细胞表达且阳性细胞集中密集分布；用药组海马CAl区可见阳性细胞表达，但阳性细胞分布较非用药组分布稀疏。(4)RT—PCR法检测到TNFa、TNFRI、TRADD、FADD、Caspase8凋亡因子mRNA表达以非用药组最高，用药组次之，假手术组最低。结论：(1)I{WTX-I蛛网膜下腔用药能稳定全脑缺血大鼠海马CAl区锥体神经细胞大体形态及线粒体超微结构。(2)HWTX-I蛛网膜下腔用药可下调全脑缺血大鼠海马神经细胞凋亡因子TNFa、TNFRI、TRADD、FADD、Caspase8蛋白及mRNA表达，对全

5、脑缺血再灌注导致的大鼠海马神经元损伤起到了明显的抗凋亡的作用。(3)死亡受体介导的信号转导通路与脑缺血再灌注损伤密切相关。阐明TNF死亡受体通路在全脑缺血再灌注损伤中的作用机制，对于有效防治由此造成的中枢神经系统损害具有重要的理论意义。关键词：HWTX-I神经细胞保护全脑缺血TNF凋亡通路相关因子ⅡABSTRACTObjeotireObservingtheeffectsofHuwentoxin—I(HWTX—I)onproteinandgeneexpressionsofrelatedfactorsintheTNFapop

6、tosispathwayofthehippocampaltissueinratswithglobalcerebralischemiareperfusioninjury，andinvestigatethepossiblemolecularmechanismfortheneuroprotectiVeeffectofHWTX-Iontheratmodelsofglobalcerebralischemiareperfusioninjury，SOastoprovideexperimentalevidenceforthenewmet

7、hodoftheclinicaltreatmentofcranio—cerebralinjury．帕拍ods48grown—upmaleSDratswererandomlydividedintosham-operationgroup，non—administeredgroupandadministeredgroup，adoptingthemodelofimprovedPulsinelli4-vesseloccludedglobalcerebralischemiadamagecombinedwiththemethodofc

8、hronicintrathecalcatheterization，observingthemorphologicalchangeofpyramidalneuronsthroughNisslstaining。theproteinandgeneexpressionsofTNFa(tumornecrosisfactor)、