未定型鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备及初步应用研究

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1、江西农业大学硕士学位论文未定型鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备及初步应用研究姓名：严寒申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：刘石泉2003.5.1未定型鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备及初步应用中文摘要自1999年开始在我国北京、广东、广西等地接种过I型肝炎弱毒疫苗小鸭广泛暴发肝炎，其l

2、岛床特征与I型鸭肝炎类似，但应用I型鸭肝炎弱毒疫苗和高免卵黄抗体均无明显的防治效果。本研究通过对该病病原分离和血清学比较，初步确定病原为未定皿清型鸭肝炎病毒。未定型鸭肝炎尿囊液毒经差速离心和不连续蔗糖／甘油密度梯度超速离心提纯后，

3、免疫BALB／c小鼠。取其脾细胞与SP2／O骨髓瘤细胞融合，用建立完善的间接ELISA方法筛选，有限稀释三次克隆，获得一株该病毒的杂交瘤细胞株。经鉴定该株单抗为IgG。亚类，该杂交瘤细胞的平均染色体为98条。细胞培养上清效价及腹水效价为l：20000和1：106，与其它病原无交叉，抗体分泌稳定。以此单抗为基础初步建立了检测未定型鸭病毒性肝炎的夹心ELISA方法。该方法特异性强、重复性好、敏感性高，是确诊鸭病毒性肝炎的一种快速、有效的方法。关键词：鸭：未定型肝炎病毒；分离鉴定：单克隆抗体；未定型鸭肝炎病毒单克隆

4、抗体的制备及初步应用AbstractTheduckingwhichhasbeeninoculatedthelivingattenuatedDHVtypeIvaccine，extensivelyabrupthepatitisinourcountrysuchasPeking,Guangdong，GuangxiandSOon，since1999itsclinicalcharacteristicissimilarwithtypeIhepatitis，buttOallthatapplytheliveattenuated

5、DHVtypeIvaccineandhyperimmuneeggyolkantibodyhavenoobviouspreventionandcureresult．Throughthepathogenyisolationandthecomparisonwiththeserum，itiscertainlycausedbytheunformedtypehepatitisVlmSi’ntheoriginalreseach．ByfusingtheSP2／0myelomacellswi廿lthespleencellsof

6、purifiedunformedtypeduckhepatitisviresImmunizedmouse，onehybfidomacelllinessecretingmonoclonalantibodiesagainstunformedtypeduckhepatitisvirus、Ⅳe他preparedaetarscreeningbyELISAandcloningthreetimesbylimitingdilution．TheimmunoglobulinsubclassoftheMcAbwereIgGIThe

7、ELISAtitersofculturesuperatantandascitieswere1：20000and1：l00theydidnotcrossreactwithotherviruses，andshowedgoodspecifity．Adouble-antibodysandwichELISA(DAS-ELISA)employingthemonoelonalantibodywasdevelopedfordetectionofunformedtypeduckhepatitisantigenThemethod

8、'sparticularityisstrong，therepetitionisgood，andthesensitivityishigh，SOitisakindoffastandvalidmethodof血ediagnoseduckhepatitisvirusKeyWords：Duck；UnformedTypeHepatitisVirus；IsolationandldentificarlonMonoclonalAntibody2未定型鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备及初步应用文献综述鸭病毒性肝炎(Duckvirush

9、epatitis，DHV)是雏鸭的一种急性高度致死性的传染病，该病的主要特征是发病急、传播快、发病率和致死性高，临床上往往在短时间内出现大批雏鸭死亡““。主要感染5周龄以内的小鸭，以2周龄内鸭最易感，潜伏期24～48h，常在出现角弓反张后迅速死亡⋯“+“3。病理剖检特点为肝脏肿胀与出血，是危害养鸭业最为严重的疾病之一。1950年，Levine和Hofstad⋯1首次分离于美国的患病北京鸭。这就是世界