撤除细胞因子对脐血细胞凋亡的影响及人参皂甙Rg1、Rb1的干预作用

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1、天津医科大学硕士学位论文撤除细胞因子对脐血细胞凋亡的影响及人参皂甙Rg1、Rb1的干预作用姓名：万晓华申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：王学谦;白人骁20030501天津市科委自然科学基金项目No．013608511天津医科大学硕士学位论文HSCUCBGSMNCHSPCHGFSCFTPOFCMPDGSPTGSBSAEPOMACSCFU—ECFU—CBFU—ECFU-GM英文缩略语词汇hematopoieticstemcellumbilicalcordbloodginsenosidesmononuclearcellshematopoieticste

2、mandprogenitorhematopoieticgrowthfactorstemcellfactorthrombopoietinflowcytometrypanaxadiolspanaxtriolsbovineserumalbuminerythropoietinmagneticcellsortingcolonyformingunit—erythroidcolonyformingunit—cellsburstformingunit-erythoidcolonyformingunit—granulocyte造血干细胞脐带血人参总皂甙单个核细胞cell造血千／祖细胞

3、造血生长因子干细胞因子促血小板生成素流式细胞仪人参二醇类皂甙人参三醇类皂甙牛血清白蛋白促红细胞生成素免疫磁珠分离系统红系集落形成单位培养集落形成单位红系爆式集落形成单位macrophage粒一巨噬细胞集落形成单位天津市科委自然科学基金项目No0136085Il天津医科大学硕士学位论文摘要目的：探讨撤除细胞因子对脐血造血细胞凋亡的影响及人参皂甙Rgl、Rbl的干预作用。方法：无菌条件纯化获得脐血CD34+细胞，采用StemSpanl”SFEM无血清液体培养基，TPO50ug／h，SCF50ug／L细胞因子组合扩增CD34+细胞7天。撤除细胞因子1天和3天，实验组加入不

4、同浓度Rgl(2．5mg／L、5mg／L、lOmg／L)、Rbl(5mg／h、lOmg／L)预处理，收集适量细胞。用流式细胞仪单色荧光标记检测新鲜分离的CD34+细胞纯度，FITC—Annexin—V双色荧光标记检测细胞凋亡率，比色法检测Caspase-3蛋白相对表达。结果：免疫磁珠MACS分离系统可有效而高质量的分离脐血CD34+细胞，纯度高达(98．28±2．62)％：用TPO和SCF可使脐血CD34+细胞明显扩增；收集扩增7天的细胞，撤除细胞因子1天后细胞凋亡率(24．79±2．80)％较对照组(2．69±0．43)％明显增高；各Rgl、Rbl预处理组，可明显

5、降低细胞凋亡率：撤除细胞因子l天和3天，Caspase一3蛋白相对表达均升高近1倍，一定浓度Rgl、Rbl预处理后，可降低Caspase一3蛋白相对表达。结论：撤除细胞因子可诱导脐血造血细胞凋亡，一定浓度Rgl、Rbl有抑制此凋亡的作用，并且Caspase一3参与了凋亡事件并发挥着重要作用。关键词：细胞凋亡造血干细胞脐血CD34+细胞Caspase一3人参皂甙2天津市科委自然科学基金项目No．013608511天津医科大学硕士学位论文AbstractObjective：Toinvestigatethecharacterizationofcordbloodhemato

6、poietiCcellSduringapoptosisinducedbygrowthfactorswithdrawalandeffectofginsenosidesRglandRbl．Methods：HumancordbloodCD34+stemcellSwerepurified(5Xi04／m1)wereexpandedwithandobtainedsterilely．CD34+cellSStemSpan“SFEMserum—freemediumcontainingcytokinesTPO(50ug／L)andscF(50ug／L)for7days．Thencel

7、lswereisolatedandincubatedbygrowthfactorsdeprivationforldayand3day．TheexperimentalgroupswererespectivelypretreatedbyRgl(2．5mg／L、5mg／L、lOmg／L)orRbl(5mg／L、lOmg／L)ofdifferentconcentrations．FlowcytometryanalysiswasusedtodeterminethepurityoffreshCD34+cellS．DuringapoptosiS，FITC—Annexin—VFC