星形细胞瘤中微卫星不稳定性研究

星形细胞瘤中微卫星不稳定性研究

ID:36657205

大小:1.11 MB

页数:36页

时间:2019-05-13

星形细胞瘤中微卫星不稳定性研究_第1页
星形细胞瘤中微卫星不稳定性研究_第2页
星形细胞瘤中微卫星不稳定性研究_第3页
星形细胞瘤中微卫星不稳定性研究_第4页
星形细胞瘤中微卫星不稳定性研究_第5页
资源描述:

《星形细胞瘤中微卫星不稳定性研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库

1、浙江大学硕士学位论文星形细胞瘤中微卫星不稳定性研究姓名:郑秀珏申请学位级别:硕士专业:神经外科指导教师:刘伟国2003.5.1错、短太掌硬壹:褥究生章敬避交鼙彩缨熬瘸孛擞墨墨攀穗定性磷变鬻江大学滚学院菠淤院辩耩篇二氍黼神经辩辑滞秀珏咎师刘伟国教授枣交攘簧微卫星怒广泛存在于原梭及真核缨胞基因缀中的简单串联燕复DNA序列,并其脊高度雾怒性,变异率掇低,驭谳德尔菇驻性方式遗传。人类许多肿瘤的发生、菠溪与墓爨锺装霆擞翌爨DNA逮蕊夔不豫窀建搿ie羚燃瓣馘a繇辕鞋霉,MSD及张成等位基因的杂含性缺必(Lossofhetemzygosity,LOH)张

2、关,某些特异染佼体微卫星的LOH多闻时佯有该位点上的抑绱熬因失瀚,并谯肿瘤的缴生发腿过程孛茨簿重要佟蘑。诲多鼓凌瞧黪囊麓鑫蛊舔、藜囊癌、黑琶素瘘、获羲霪、瓣膜瘿、誊审经母缌瞧癣哮l均发域商广泛MSI现羰。现鼓汪实囊炼奏梭缎腿中巷在错配修复基因系统(Mi8matc栅娜ai瑁enesystem-MMR),参与赢制后的修复,通过漤豫DNA台溅骛饕溪浚豢簿DNA簦裁筠稳定淫蠢辍囊鞋;蘑纛蠢豁懿N撩*IR系绞中主要毽掭6静罄因,肆hMLHt、hMSH2、hMSH3、hPMSt、hPMS2濑hMSH6e当MMR.基阑功能失活(如撼阔突变、启动子隰甲基化

3、),就不能修复DNA复制蓬羲孛懿缮潺,曩导蒙澈銎鏊DNA黧复寿魏辩不稳囊链,表蕊为MSt耪LOHa匿避;瓣胶袋臻中擞翌星蚕稳定缝磅巍饔劈予认识驳袋瘗菱受、菱曩襁糕,熨好揭示胶质瘤发瞒分子瓣础。/姜验材料和仪器乙{,实浚糖篓:蓬黟缨藏瘗番零寒叁溪二嚣麓祷羟努餐手术黎零,蠢蹲彀意卷舞辩菠夫掌蕊圭研究盎擎篷诧交簿静黥盘臻洚委露戆织DNA瓣爨。谶熬:繁囊酶K、T键DNA蘩窘懿等魏蠡丹麦DAKO公司。氯仿、异戊簿、乙醇、醋酸钠等购自杭州长征化学试剂厂。2.实验坟器;疆温藕:宁液江南彼嚣厂。PeR电泳倪和越逮离心机:北京六~纹鼗厂。紫舞努竞毙渡莰;主海

4、势凝寝嚣厂。实骧方法l。DNA懿獭掇①组织标本DNA的抽撼:将纽炽碾碎艏骚白酶K消化,50’C孵宵12—18小薅。等髂蔽酚,鬣羹,辩发簿箍摄DNA,酪黢镳、己嚣流涟,"rE溶辩,4X2豫襻。②盎液橼本DNA躲挞提:蛋蕊懿K消惚,鼹℃拳港中l小时。黪,氯捷,暴戊醇抽提DNA,秃水乙醇凝醋酸钠i冗淀,TE(3-羟甲基.氨撩乙烷m艺二氨网艺酸)漆察,辱℃瀑套+羔擞翌星PCR扩蠼选用D9S171、D9S165、D9S54、APOC2、D19S112、HRC等6个微卫星惋点速{亍狳溺。徽量鼙DNA雩{饕净蕊疑GenomeDataBase(http:#

5、gdbwww,gdb.org]gdb)查获;孳l貔潦串辩懿上海绥糙耋赣爨合蕊。PCR夏嫩体系灸:50mmol/LKCL,10mmol/L惴8。CI,l,Smol/LMgCh,200umol/LdNTPs,模板DNA200ng,上下游零;裙各50pmot,TaqDNA聚台酶1U热承至弱引L。PCR反应雾数为:夸砗℃交蝗5rain,然嚣迸入蠖瑟(瓣℃50◇,嚣℃60秒,?2℃60秽,)莛3S令溪环,锻后72℃延伸10min,4℃保存。3。瑟褴聚丙烯酰胺凝肢电泳凝荟s警滚整聚蠢矮蘸黢凝获,浆PCR扩璐产臻{蛰程,与等葵联魏变遂熬释缓冲波混台磁于9

6、5'(2变性torain,冰,b骤冷,取15ul煺一上样。400V恒压电溶。报攒指示剂二甲苯青的位置荆断产物泳动位溅。一≈~濒漫大学灏±嵇怒生举毽论文4。锻染鼹色褥带羧熬玻璃凝努剩羯10%五蘩霸l%磷酸楚凌5rain,蒸谗农添洗,耀0,2%磷酸镊溶液染色10min,蒸馏永漂洗蓐用1.5%NaOH、O..4%甲醛溶液翌截至带鍪瀵密,照耀惩予缝聚分撰。5。臻莱粼蘸分聿拜电濠图谱,MSI定为虢瘸缀织楣瓣予正鬻缴织密黼条蒂熟数量及大小豹激变;LOH为黔癌蒺一等经蓥飘象带瀵必或耱对密度减少50%戳上。凝有实验数据弱餍SPSSl0.0FORWINDOW

7、S统计较释包避蠢簸瑷。结果本实验所采糯6个微重星筏煮静染稳体位餮及莓l耨侉嗣显表1。46捌壁形缎藏癌的MSl分静子裘鹅:共有22例毒在MSt(47。寒%);LOH共弩l《翻(30。毒%),其中l~ll缓3铡(6.5%),1101V级l{恻(23。9%),爨体位点参觅裘2,可觅脾瘤的黪瞧程度离{氐与LOH的发生育鬣萋差辩(P妁.05),盛19号染恕髂的LOH与瓣瘿豹恶蠛程度糍骶之闯氇毒在疆蓉差羚(P

8、发生有鼎罄差异(x2:4.7569)19碍染色体的LOH与肿瘤怼雠程度之间存在鼹赣差异(x2司.2姻9)缱埝MSl与臻形细胞瘸关系豁切,LOH与型形细胞瘸恶性进展有关。{《{缀每

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。