基于孕妇游离DNA的胎儿染色体非整倍体检测试剂质量

《基于孕妇游离DNA的胎儿染色体非整倍体检测试剂质量》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、基于孕妇游离DNA的胎儿染色体非整倍体检测试剂质量控制技术评价指南（高通量测序法）11.前言对孕妇外周血中游离DNA进行高通量测序(High-ThroughputSequencing)，并分析孕妇外周血中携带的胎儿的染色体突变异常风险，特别是染色体非整倍体变异的检测，是近几年出现的无创产前筛查新技术。本指南旨在规范申请人在胎儿染色体非整倍体检测试剂盒（高通量测序法）的产品设计开发、性能评价的指标和要求，并为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考，不代替注册申报资料的准备及撰写的指南和规范。本指南主要是对企业研发、质检和

2、产品应用相关质量控制和分析的指导性文件，应在遵循相关法规的前提下使用本指南。本指南仅作为技术指导性文件使用，需根据技术的发展和实际需要进行适当的更新，本指南不具有法律强制性。2.适用范围本指南所述的胎儿染色体非整倍体检测试剂（NoninvasivePrenatalTest,NIPT）是采用低深度全基因组的高通量测序法，指的是直接通过对孕妇外周血中游离DNA进行文库构建、上机测序的第二代高通量测序方法，并不完全适用于高深度的目标片段测序法，SNP突变测序法和表观遗传学甲基化的测序法等其他高通量测序法。和本指南不相适应的其他高通

3、量测序法，可以参照本指南的性能评价、质量控制的要求，并通过企业参考品，证明和本指南的要求具有实质性的等效性。对于第三代单分子测序或其他测序方法，在文中并未涉及，但高通量测序技术发展迅速，第三代单分子测序方法在企业内部参考品设臵、性能评估等，如有适用的方面，可以参照执行并证实实质等效性。2适用检测类型：胎儿染色体非整倍体（fetalchromosomeaneuploidies）中的21三体、18三体、13三体（Trisomies21、18、13，即T21、T18、T13）。本指南也可适用于其它胎儿染色体非整倍体的检测，如XXX

4、，XYY，XXY,T9等。适用人群：对孕周12周（包含12周）以上的孕妇进行产前筛查，其结果不能代表对孕妇怀有三体胎儿的确认，必须要经过产前诊断进行确认。伦理学问题：终止妊娠应在遵守我国相关法律法规和行业规定的前提下选择，该项检测不得作为终止妊娠的依据。3.诊断试剂的设计开发要求基于游离DNA的胎儿染色体非整倍体检测试剂（NIPT）的设计和原理至少要考虑到以下几个方面：3.1预期用途明确胎儿染色体非整倍体检测试剂（NIPT）的预期用途，包括定性或定量检测、被测孕妇孕周特征、样本类型和被测物等。按照《体外诊断试剂说明书编写指导

5、原则》进行，介绍临床适应症及背景，说明相关的临床或实验室诊断方法等，应介绍产前诊断金标准。明确该产品作为产前辅助诊断用途，其结果要由产前诊断金标准进行确认。3.2测试方法学阐明胎儿染色体非整倍体检测试剂（NIPT）的设计原理和方法学，需要重点指出设计原理和方法的关键点：（1）详细说明母体胎儿游离DNA判断染色体数量和检测变量的相关性；（2）详细说明实验过程如高通量测序的文库构建方法及原理；（3）在实验过程中的质量控制和标准品的构建；（4）数据分析和算法的详细说明等。如低覆盖全基因组的胎儿染色体非整倍体检测试剂（NIPT）原理

6、是：孕妇母体血浆中存在胎儿游离DNA（cffDNA，cell-freefetalDNA），片段长度主要为～160bp，几3乎全部来源于胎盘的滋养层细胞，其浓度和孕周密切相关并以一定比例稳定存在于母体外周血浆中。取母体血浆提取包含正常母体和胎儿的血浆游离DNA，不经过处理或经过片段化选择，通过文库构建，最后进行上机测序，再通过软件分析数据获得染色体数目评价结果。当对怀有T21胎儿的母体血浆游离DNA数据进行分析时，其21号染色体游离DNA总数会有小比例的升高，结合生物信息学分析方法，对21号染色体所属的DNA片段数量进行统计，

7、与大量样本构成的参考集合相比较，根据数理统计的原理和血浆DNA测序数量的结果、染色体数量的相对变化，通过统计学算法区分这一微小差异来实现利用孕妇血液中胎儿游离DNA进行胎儿染色体非整倍体的产前筛查。但高通量测序法不能对染色体结构异常进行检测，不能代替传统筛查中的开放式神经管缺陷筛查等。3.3主要原材料胎儿染色体非整倍体检测试剂（NIPT）的主要原料是指所有与预期用途相关原材料，包括从DNA提取之后到测序文库装载入测序芯片之前的重要试剂。主要原材料一般由：相应功能的酶（末端修复酶、DNA连接酶、缺口修复酶DNA聚合酶等）、核苷

8、酸序列（如引物、接头序列、标签序列等）、缓冲液及dNTP组成。3.4辅助试剂组成的要求辅助试剂组分分为如下几个部分：（1）采样时所需要的试剂或材料（2）与采样得来的孕妇外周血或者血浆的保存、运输和储存相关的试剂或材料（3）和血浆DNA提取相关的试剂或材料（4）和特定的高通量测序仪相关的通用