孕妇血浆中游离胎儿dna的检测和分析

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1、郑州大学2008届硕士学位论文中文摘要孕妇血浆中游离胎儿ONA的检测与分析研究生陈晓蕾导师李晓文郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室河南郑州450052摘要研究目的:利用孕妇血浆中的游离胎儿DNA，结合母源DNA对照，尝试建立不依赖于胎儿性别和父本DNA、可适用于染色体数目异常和单基因遗传病的无创性产前诊断方法。方法:健康孕妇41名，分别抽提其血浆标本DNA。对照组为此41名孕妇口腔上皮拭子DNA、外周血白细胞基因组DNA，验证组为其中17名孕妇丈夫的口腔上皮拭子DNA、4名新生儿脐带血DNA。根据样本来源不同，分别以PCR、二次PCR(BosterPCR)、降落PCR(touch

2、一downPCR)等方法，扩增D17S1293、DZlsll、DXS8377等3个具有高度多态性的短串联重复序列(shorttandemrepeat，sTR)位点和s盯基因(sex一determiningregionony)。sTR位点扩增产物进行变性聚丙烯酞胺凝胶电泳并银染显色，SRY基因扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。同一家庭的成员或同一个体不同来源的DNA样本为一组，分别比对各组扩增条带，检出胎儿的父源性等位基因，并结合SRY基因与X一STR位点鉴定胎儿性别。结果:1.41例孕妇血浆DNA中均检出非母源性等位基因条带。其中17例经父源DNA验证，4例经胎儿脐带血DNA验证，证实非母源性等位

3、基因条带确为父源性胎儿DNA。2.41名孕妇血浆DNA，结合SRY基因与X一STR位点进行胎儿的性别鉴定，38例判断明确，且其中10例经分娩胎儿证实。结论:郑州大学2008届硕士学位论文中文摘要1.检测孕妇血浆中游离胎儿DNADXS8377、SRY基因，可较为准确、快捷地获得男性和女性胎儿的父源性DNA信息，可用于性连锁遗传疾病的产前基因诊断。2.检测孕妇血浆中游离胎儿DNA常染色体STR基因座，可用于常染色体遗传疾病的产前基因诊断。3.采用降落PCR、二次PCR等方法，可以提高孕早期微量游离胎儿DNA的扩增效率。【关键词〕:产前诊断;游离胎儿DNA;PCR;短串联重复序列;SRY基因郑州大

4、学2008届硕士学位论文英文摘要DeteetionandAnatysisofcell一freefetalDNAinmaternalPlasmaPostgraduate:Chen兀aolei丁Utor:Li刀aowenD印admentofCellBiologyandMediealGeneties，SchoolofBasieMediealSeienee，ZhengZhouUniversity，ZhengZhou，450052ABSTRACTObjeets:ToestablishanaPProachfornon一invasivePrenataldiagnosiswhichindePendentfr

5、omfetalsexandPatemaleontrol，andalsocanbeusedfordetectionoffetalchromosomalaneuPloidyandsinglegenemutationsusingeell一freefetalDNAinmatemalPlasmaeombinedwithmatemaleonirol.MethodS:41PeriPheralbloodsamPleswereobtainedfromhealthyPregnantwomen.Cell一freefetalDNAwasextraetedfrommaternalPlasma.DNAextraeted

6、fromtheiroralswabsandwhitebloodeellswastakenasmdemalcontrol.17husbands’oralswabsand4new一boms，umbiliealeoulbloodsamPleswerevolunieeredtoofferasverifieationgrouP.ThreehighlyPolylnorphieshorttandemrePeat(ST助loci:D1751293，DZISll，DXS8377togetherwiththeSRY(sex一detenniningregionony)genewereamPlifiedbyPCR，

7、BosterPCR，ortoueh一downPCRaeeoulingtodifferentsourcesofDNAs田nPles.AlleliediseriminationanalysisofthreeSTRloeiinvestigatedthroughdenaturingPolyaerylaxnidegelelectrophoresissilver-staining，whileSRYgeneWasexami