孕妇血浆胎儿dna检测及其在产前诊断中的应用论文

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1、孕妇血浆胎儿DNA检测及其在产前诊断中的应用论文王修海姜晓静纪向虹【摘要】目的检测孕妇血浆中游离胎儿DNA的水平，探讨应用孕妇血浆胎儿DNA进行非损伤性产前基因诊断的可行性。方法应用血浆DNA抽提法提取63例孕7～40周妇女血浆中胎儿DNA，运用PCR扩增技术对SRY基因和4个短串联重复序列（STR）多态位点（D21S11、D21S1411、D21S1412、D21S1414）进行检测。结果在33例妊娠男胎的孕妇血浆中，有29例出现SRY基因扩增带，孕早、中、晚期的SRY基因检出率分别是72.7%(8/11)、90.9%(10/11)、100%(1

2、1/11)。用4个单一STR多态位点检测出胎儿特异等位基因的比例分别为51/63、49/63、16/63、48/63。联合应用4个多态位点可以确定所有孕妇血浆中的胎儿DNA。结论在不同的妊娠阶段都可检测到孕妇血浆中的胎儿DNA，胎儿DNA检出率随孕周的增加增高。孕妇血浆中游离胎儿DNA可以用于无创伤产前诊断。【关键词】胎儿DNA产前诊断聚合酶链反应串联重复序列［ABSTRACT］ObjectiveTodetecttheregularityofappearanceanddisappearanceoffreefetalDNAinplasmaofpreg

3、nantenandtoexplorethepossibilityofnoninvasiveprenatalgenediagnosisbyusingfetalDNAinmaternalplasma.MethodsTheDNAtemplatesaDNAextractionfrom63gravida(conceived6-40a.SRYgeneandfourshorttandemrepeats(STRs)(D21S11,D21S1411,D21S1412,D21S1414)offetalDNAerasechainreaction(PCR).Results

4、SRYgenealebearingpregnantenplasma.ThedetectingratesofSRYgeneediumtermpregnancy,andlatepregnancy,respectively.ThedetectingratesofafetalspecificbandeansoffoursingleSTRsanalysis,respectively.ThefetalDNAinplasmaenbybiningaternalplasmacanbedetectedindifferentgestationalstages.T

5、hedetectionratesoffetalDNAinmaternalplasmaincreaseaternalplasmacouldberegardedasthegeneresourcefornoninvasiveprenataldiagnosis.［KEYgCl2（25mmol/L）8μL，引物（109F、245R）各300nmol/L，4×dNTP（10mmol/L）200μmol/L，TaqDNA聚合酶1.25U，样本DNA5μL，去离子水20.75μL。PCR反应程序：95℃预变性10min；95℃变性15s，60℃退火1min，40个

6、循环；72℃延伸10min。每次扩增均设阳性和阴性对照。1.2.4孕妇血浆胎儿DNA多态位点的PCR扩增25μL反应体系内含有：10×Buffer2.5μL，4×dNTP（10mol/L）0.3μL，MgCl2（25mmol/L）1.5μL，引物D21S11、D21S1411、D21S1412、D21S1414F、R（10μmol/L）各2.0μL，样本DNA5μL，TaqDNA聚合酶1.5U，去离子水11.4μL。PCR反应程序：94℃10min；94℃48s；60℃48s，72℃1min，40个循环；72℃延伸10min。1.2.5PCR产物的

7、检测分别取5μLPCR产物在60g/L非变性聚丙烯酰胺凝胶（交联度为丙烯酰胺∶甲叉双丙烯酰胺=29∶1；离子强度为1×TBE）中电泳，200V、25mA室温下电泳1.5h。凝胶用硝酸银染色，照相记录。根据电泳条带进行实验结果分析。2结果2．1不同孕周的孕妇外周血浆SRY基因检测胎儿出生后证实63例胎儿中33例为男胎，30例为女胎。在33例男胎妊娠的孕妇外周血浆中检测到SRY基因，不同妊娠时期检出率分别为：孕早期72.7%(8/11)、孕中期90.9%(10/11)、孕晚期100%(11/11)。而在30例女胎妊娠的孕妇外周血浆中未检测到SRY基因。

8、该方法最早可于孕7周检测出该基因，分娩后2h内检测不到(图1)。2．2孕妇外周血胎儿DNA各STR位点的多态性检测不同位点