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《孕妇外周血胎儿细胞的富集技术及其在产前诊断中的应用论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、孕妇外周血胎儿细胞的富集技术及其在产前诊断中的应用论文羊膜穿刺和绒毛吸取是目前常用的产前诊断技术，但其操作具有创伤性，可导致宫内感染、羊膜破裂、流产、胎儿畸形或死亡等［1］。建立非创伤性产前诊断方法，降低产前诊断的风险，是产前诊断工作的一项重大课题。自50年代从孕妇外周血中发现胎儿细胞后，学者们开始关注这类细胞在产前诊断中的应用价值，但因技术条件的限制，这一非创伤性诊断方法进展缓慢。直至80年代中期.freelRNA基因信号，提示HLA-G很可能是胎儿NRBC的另一抗原标志。1.3消长规律探讨胎儿细胞的消长规律有助于选择产前诊断的最佳时间。Tom
2、as等［9］发现人工受精的妇女血液检出Y染色体特异性序列的时间为4周零5天，最迟50天，首次检出的平均时间为6周±4天，消失时间为产后2个月。Simpson等［10］研究发现，从孕妇外周血分离胎儿NRBC的最佳时间为妊娠后10～18周。马旭等［11］发现19例妊娠男胎妇女外周血Y染色体锌指蛋白基因(ZFY)在妊娠6周、11周、14周时的检出率分别为5.3%、68.4%和95.0%，同时还发现妊娠女胎的妇女外周血无1例ZFY假阳性，提示分离胎儿NRBC进行产前诊断的最佳时间为妊娠14周。1.4含量胎儿NRBC含量高低关系到产前诊断的准确性。众多的研
3、究表明，胎儿细胞与母体在细胞之比为1∶5000～1∶20000，其中胎儿NRBC的比例在1∶105～1∶109之间。从理论上，只要有理想的富集、分析方法，胎儿NRBC含量完全可以满足诊断需要。2胎儿细胞的富集纯度和产量是衡量胎儿细胞富集效力的两个重要概念，纯度是指分离后样本内胎母细胞百分比，产量是指实际获得的胎儿细胞数，不同方法对富集胎儿细胞的纯度和产量有很大影响，现就现有的富集方法分述如下。2.1密度梯度离心法利用聚蔗糖与泛影酸钠混合物作分离介质，加至孕妇血中离心，根据细胞密度的差异分离出胎儿细胞。该法简便易行，但胎儿细胞的纯度和产量不高。宋杰
4、等［12］用此法分离胎儿细胞预测胎儿性别的灵敏度和特异度分别为84.85%和96.77%，总符合率为90.63%。2.2γ珠蛋白阳性选择法胎儿血红蛋白主要为HbF，而成人为HbA。HbF由两条α珠蛋白和两条γ珠蛋白链组成；HbA由两条α珠蛋白和两条β珠蛋白链组成。利用抗γ珠蛋白的单克隆抗体通过流式细胞计数仪可富集胎儿NRBC。Zheng等［3］证实83%～100%抗γ珠蛋白阳性细胞为孕妇血液中的胎儿细胞。2.3荧光激活细胞分类法又称流式细胞计数仪分离法。先制备单核细胞悬液，用荧光素激活胎儿NRBC，利用流式细胞计数仪将胎儿NRBC从孕妇血液中分离
5、出来。Bianchi等［5］用荧光素标记抗CD71、CD36、GPA抗体后分离胎儿NRBC，再用PCR进行Y染色体序列分析，发现单独用抗CD71、CD36富集胎儿NRBC诊断胎儿性别的准确度分别为57%和88%，而单独用抗GPA或同时使用抗CD71、CD36富集胎儿NRBC诊断胎儿性别的准确度为100%。A,1993,270(19)∶2357-2361.［11］马旭，王毅，王琳，等.经母血采集胎儿细胞行产前诊断的最佳时间探讨.中华妇产科杂志1997，32(5)∶293-295.［12］宋杰，李守柔，张爱臣，等.富集孕妇外周血中胎儿细胞行性别诊断.
6、中华妇产科杂志，1998，33(1)∶74-76.［13］ZhengYL,CarterNP,PriceCM,etal.Prenataldiagnosisfrommaternalblood:simulataneousimmuophnotypingandFISHoffetalnucleatederythrocyteisolatedbynegativemagiccellsortion.JMedGe,1993,30(12)∶1051-1056.［14］D,PatelP,D,PatelP,Baiget,etal.Prenatalsexdeterminati
7、onfrommaternalperipheralbloodusingpolymerasechainreaction.HumGe,1993,90(5)∶483-488.［18］马旭，张思仲，罗安雪，等.利用孕妇血中胎儿细胞进行产前诊断的初步研究：胎儿SRY基因的鉴定.中华医学遗传学杂志，1995，12(5)∶265-269.［19］LoYMD,BoinationoffetalRhesusDstatusbyDNAamplificationofperipheralbloodofRhesus-negativemothers.AnnNYAcadSci,19
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