基于深度测序技术的非侵入性胎儿染色体非整倍体检测ppt课件.ppt

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1、中南大学湘雅医院产前诊断中心湖南家辉遗传专科门诊部邬玲仟基于深度测序技术的非侵入性胎儿染色体非整倍体检测染色体非整倍体定义：体细胞染色体数目增加或减少一条或数条的个体类型：a.单体型：2n-1；X，21，22号丢失常见。b.三体型：2n+1；常染色体13、18、21三体常见，性染色体三体型有XXX、XXY、XYY。c.多体型：仅见于性染色体；如48，XXXX49，XXXYY。21三体综合征唐氏综合征（Down’sSyndrome，DS）先天愚型足月新生儿最常见的染色体疾病，发病率1/700至今没有根治方法我

2、国每年约2000万新生儿,每年约有26600个DS儿出生。我国有大约60万以上的DS患者。特殊面容：面部扁平、鼻梁低平、眼距宽、外眦上斜、内眦赘皮、张口吐舌等智力障碍：患者智商（IQ）通常为30～60。生长发育迟缓和肌张力减退：出生体重偏低，肌张力低下，身材矮小，短颈，颈背皮肤松垂，手短而宽、通贯掌、小指弯曲等。至少1/3的患者伴发先天性心脏病。十二指肠闭锁和气管食管瘘等伴发症也较其它疾病常见。患白血病的风险为正常人群的15倍。临床表现18三体综合征18三体综合征是次于先天愚型的第二种常见染色体三体征。新生儿发生

3、率约为1/7500。主要临床表现:智力障碍、生长发育迟缓、胸骨短、严重的心脏畸形以及肌张力亢进等。颅面部的畸形包括小颌畸形、枕部突出、小耳以及低位耳等。双手呈特征性的握拳状，摇椅足。13三体综合征发病率为1/20000～25000。主要临床表现：严重的中枢神经系统畸形，内脏畸形，颅面部的畸形，手足畸形等；13三体综合征21三体综合征二级预防模式早孕期筛查：NT+PAPP-A中孕期筛查：二联、三联或四联得到最终的风险值产前诊断母亲血清标记物和超声筛查的可信度结合母亲年龄的三联筛查，唐氏综合症检出率:~65%，假阳性

4、率:4.5-5.0%增加抑制素A，可以将检出率增加到75%结合母亲年龄的NT测量，21三体检出率：77%，假阳性率：5%.结合生化分析和颈透明度的唐氏综合症的检测检出率可以达到89%，假阳性率：5%.WapnerR,etal.(2003)First-trimesterscreeningfortrisomies21and18.NEnglJMed349:1405–1413血清学筛查存在的问题孕周的确定不准确许多单位未严格控制孕期筛查的时限取血时间与开单时间，称体重时间不一致的问题实验室操作缺乏统一的技术规范染色体综合

5、征侵入性产前诊断侵入性产前诊断的利与弊47,XY,+21利：目前金标准弊：a）一定的流产风险：1%b）报告周期长：1个月c）孕妇和家属承受较大思想压力主要参考文献：TaborA,etal.RCTofamniocentesisin4606lowriskwomen.Lancet1986;1:1287-93全国妇幼卫生检测办公室的调查显示2007-2009年全国产筛4097801人，21三体高风险176130人，产前诊断的93504人，确诊为21三体胎儿6679例。产前诊断服务量不能满足需求基于FISH的产前诊断优点：

6、所需样本量少，检测周期短（24h-48h）。缺点：价格昂贵，通量小。基于定量PCR的产前诊断优点：①所需样本量少，检测周期短（24h）。②价格便宜，通量大。缺点：对于嵌合型21三体，定理PCR可能会出现假阴性，样本中母血的污染也会影响结果的判断。目前快速产前诊断方法的利弊母体外周血含有游离胚胎DNA主要参考文献：Fetalcf-DNAdetectedviaYchromosome。LoYMetal.,Lancet1997母体外周血的游离胚胎DNA几乎全部来源于绒毛层胚胎DNA片段比较小，长度在75bp和250bp之

7、间。母体外周血中的胚胎DNA含量在5%到30%之间。孕周越大外周血中胚胎DNA的含量越高。母体血浆DNA的存在形式分娩后母体cffDNA快速降解Loetal.AmJHumGenet1998;62:768cffDNA半衰期16.3min，2h后检测不到VS母血胎儿细胞持续存在数年血浆DNA的高母体DNA背景血浆母体DNA胚胎DNA20%胚胎DNA母体DNA高背景带来的检测难度血浆20%胚胎DNA101121染色体3体带来的微量DNA变化纯胚胎DNA，唐氏与正常21号染色体的剂量变化：3:2=1.5血浆DNA中胚胎D

8、NA占20%时，唐氏与正常21号染色体的剂量变化：11:10=1.1母体血浆DNA中胚胎的DNA一般占5%到30%，大多小于20%唐氏与正常21号染色体的剂量变化大多<1.1当胚胎DNA只占5%时，怀唐氏胚胎的母体血浆DNA的21号染色体量理论上会增加2.5%21号染色体只占全基因组的1.3%，检测1.3%的全部DNA的2.5%的增量要求非常高的精确度荧光定量PCR（re