重组人生长激素液体制剂稳定性的研究

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1、吉林大学硕卜学位论文作者:金光泽提要人生长激素(hGH)是脑垂体前叶分泌的一种多肤类激素，191氨基酸残基，分子量约22Kda,有两个S-S，无糖基化，是人类出生后促生长的最重要的激素，有一定的种属特异性。在临床上主要应用于治疗矮小症、成人GHD及有关促进代谢加速、组织修复、抗衰老、增加机体免疫力等方面。为了方便患者使用并提高产品质量，我们通过一系列实验对重组人生长激素的液体制剂配方进行了摸索。在实验中，我们逐步确定了制剂中缓冲体系、非离子表面活性剂、pH及添加剂的条件，最终得出包含5mM组氨酸、I.Omg/ml泊咯沙姆188,1.Omg/mIPEG20000,2.5mg/ml苯酚

2、，pH6.0的rhGH液体制剂配方，并对最终配方样品进行了4℃留样检测。检测结果显示，我们研制的rhGH液体制剂可在4℃条件下稳定存放1年以上。另外，根据相关文献了解到三氟乙醇(TFE)有促进多肤分子形成a一螺旋的作用。我们在制剂中加入适量的TFE对rhGH的稳定性起到了非常好的效果。尽管未发现有TFE应用于注射剂中，但通过作用多肤分子结构，增加分子紧密程度来增强药物稳定性的方法为我们今后的实验开辟了新的思路。吉林大学硕卜学位论文作者:金光泽绪论一概述人生长激素(hGH)是脑垂体前叶分泌的一种多肤类激素，191氨基酸残基‘’)，分子量约22Kda，有两个S-S(2)，无糖基化，是人

3、类出生后促生长的最重要的激素，有一定的种属特异性。1979年，DNA生物技术使得人类GH的DNA顺序密码在大肠杆菌中的表达成为可能，最初合成的GH与人垂体提取的hGH相似，但在N端多了一个蛋氨酸，为192肤，这是第二代的生长激素。第三代的生长激素是在原来的重组技术中，去除了蛋氨酸，因而与人类天然垂体的GH结构完全相同为191肤。GH为体内代谢途径中重要的调节因子，对蛋白质、脂肪、糖类、体液、矿物质代谢皆有不用的生理作用:1.促进蛋白质的合成GH促进氨基酸转运入细胞，胞内合成RNA增多，出现正氮平衡。GH刺激肝脏生成IGFs,IGFs又有促进细胞分裂、增殖、合成蛋白的作用。GH促生长

4、、促代谢的功能即可是直接的，亦可是间接通过IGFs的效应。临床研究正式在严重降解代谢病理情况，如灼伤、创伤及外科术后，GH治疗可促进同化作用，增进氮、钾、磷等的正性平衡‘2)2.调节脂代谢GH对脂代谢有降解作用。GH注射后血中脂肪酸初期可暂时下降，约30分钟至2小时后即上升，是GH直接对脂肪细胞融脂的结果。GH亦刺激前脂细胞向脂细胞分化，使脂细胞数吉林大学硕士学位论文作者:金光泽增多。GH既增进融脂，又抑制游离脂酸的重新酷化‘3'aGH缺乏患者腹部皮下脂肪堆积最明显，用GH治疗后其消融亦最显著。3.对糖代谢作用GH对糖代谢作用复杂。静脉注射GH可使血糖迅速下降，可能是转运葡萄糖入脂

5、肪细胞及骨细胞之故。但临床观察GH分泌过多的肢端肥大症患者，其糖尿病发生率高。GH对糖代谢影响有短期及长期效应的差别。短期注射GH可见有Ins样效应，产生中度、急性、暂时性低血糖，但伴同对Ins释出的抑制。长期GH的升高可致血葡萄糖浓度上升(葡萄糖产生增多，转运至细胞内减少)。4.对水、矿物质代谢GH促进生长及合成代谢，胞内含物增多，有钾、磷酸盐的储留，钠储留少于钾。GH缺乏用GH治疗，对血钙影响不大，但尿钙增多，肠钙吸收亦增加。GH参与对体液的调节，尤其对细胞外液.可促进肾小管对钠回吸收，亦刺激血浆肾素活性，使血管紧张素、醛固酮分泌增多，后者可致水、钠储留‘礴，。从80年代开始，

6、由于生物技术的发展，使得GH供应上的限制被取消，拓宽了治疗病种，不仅在治疗矮小症方面，亦向其它领域发展。如成人GHD及有关促进代谢加速、组织修复、抗衰老、增加机体免疫力等方面皆为当前对GH临床应用探索的前景‘，，。二.研制生长激素液体制剂的意义由于用rhGH来缓解侏儒症需要很长一段时间，所以允许患者自己进行注射，一般从治疗开始就可在家用药。目前使用的人生长激素以冻干剂型为主，在使用rhGH的冻干剂型时，先将制剂溶吉林大学硕卜学位论文作者:金光泽于适当的溶剂中，然后由患者或其家人进行皮下或肌肉注射，所以需要医生正确指导患者如何进行溶解，以避免产生会减弱rbGH生物活性的凝聚物。这样就

7、无法排除各种不可预见的错误操作出现的危险性。因此，需要一种合适的水性制剂来减少用药给患者及其家人带来的不便。另外，从制造者的观点看，在生长激素制品生产中避免冷冻干燥步骤也是一个优点。冻干工序也增加了产品聚合的可能性，对产品质量有一定的影响。因此，为了便于病人操作和提高产品品质，需要稳定的生长激素液体制剂。三重组人生长激素的不稳定性作为一种多肚类激素，重组人生长激素具有多肤的不稳定性。(一)引起多肤不稳定性的原因(I)脱酞胺反应(6)在多肤分子中，Asn残基易通过非酶催