反义寡脱氧核苷酸抑制细胞周期素D1表达及对胃癌细胞增殖的影响

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1、兰州医学院硕士学位论文反义寡脱氧核苷酸抑制细胞周期素D<,1>表达及对胃癌细胞增殖的影响姓名：王雪琴申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：杨林西;韩跃武2003.4.1反义寡脱氧核苷酸抑制细胞周期素D，：表达及对胃癌细胞增殖的影响摘要目的：细胞周期素D。(cyclinD。)在胃腺癌患者中的高表达提示患者的预后不良。本研究通过基因反义封闭技术体外抑制cyclinD，的表达，从而抑制胃癌细胞的增殖。方法：本实验分为三组：反义寡脱氧核苷酸组、随机寡脱氧核苷酸组和对照组。实验中以胃腺癌BGC-823细胞株为研究对象，采用硫代磷酸修饰的cyclinD。反义寡脱氧核苷

2、酸(Antisenseoligodeoxynucleotide，ASoD娜处理BGC-823细胞后，观察cyclinD。ASODN对1EC-823细胞基因表达及体外增殖活性的影响。结果：台盼兰染色显示在8—16I．虹ol／1的反义寡核苷酸作用下，BGC-823细胞生长受到明显抑制。抑制作用随反义寡核苷酸浓度增加而加强，具有剂量依赖性；此时台盼兰染色显示96％以上的细胞为活力细胞。撤去反义寡核苷酸，细胞又可逐渐恢复原有的生长速度，呈现可逆性。而随机寡核苷酸在8-16¨moi／i浓度下无生长抑制作用。但浓度为20moi／i的反义寡核苷酸和随机寡核菅酸均使细胞几乎处于停止增殖状

3、态，此时台盼兰染色显牙÷汉45％左右的细胞存活，表现出非特异性细胞毒效应。M盯巍蝴4细胞增殖活性见不同浓度ASODN均能抑制BGC-823细胞增殖，抑制作用在48小肘最强。RT-PCR检测cyclinD；mRNA减少。免疫缎化S叩法及激光共浆焦提示cyclinD，蛋皇表达明显降低。漉式细胞仪检澳4发现Go-G；凝纲胞含量峦对照缀麴46。羯璞至能弱，两Gf《秘S期缨脆分嬲麸11．戳、41．强降刭8。4键、27．1％，表明cyclinD，ASODN导致大部分纲脆滞鼙在铙期纲戆。结论；使爝入王合成的cyclin魏反义寡脱戴核替酸沁∞哟可蝴性酶抑锖

4、j霄膝癌BGC-823细胞株c

5、yclinD，的表达，从而调控缅胞周飙抑制细胞增殖。笑键询胃癍细胞周期素Dl，反义，寡脱氧核苷酸INVⅡROEXPERD征!NTOFINHIBITINGCELLPROⅢER觚0NoNHUMANSTOMACHADENOCARCB姻M怆CELLBGC-823CELLLINEBYCYCLIND1ANTISENSEObjectlv嚣：1bcaimofthisstudywasto缸髑d瞬theeffectofirtvitrofllnlJsenseoligodeoxynucleotide(ASODN)ofcydinD1OnthecyclinDl鲫e舒卿璐画0nandcell舢eraf

6、ionofhmnanstomachadcllocal'lgil均macellBGC．823Oeuline．Methods：Thisstudycomai】[1sthreeo甲既in搬妇tgmul丝：ASODNgroup,RODNgroupandconlrolgroup．PhosphorothioateeyelinDlASODNandIBndomoligodeoxynueleotide(RODN)wel-e母删电器i刁edandnansfeetedintoBGC-823Cells．Theireffectsoncellproliferation、黼examinedbyM兀me吐

7、Iod’瑚_-腿m姒im删mob姗od搬n枷鲰如掇咿蝴Results：Thelxoliferationofhummstomachad岛均c叫℃函加皿cellBGC-823Celllinewassignificantlyinhibifiedby岫g8-16lanoFl油DIASODN．"llaeidaibitionwasdc髓埘魄崩觚but8-16Ⅲ,nol／IRODNgroupshowsl'tOel‰‘However,nogrowthw豳observed缸20pmol／lASODNgroupandRODNgroup．劬liIlDiASODNcould鄹捌坶inhibitⅡ

8、legrowth3ofBGC一823Cellline．T1KRODNcouldn'tinhibittheproliferationBGC一823Cellline．Theinlu'bitionpeakedat48houraftertransfeclionbyIVlTrmethodandwasdose-dependent．Theo甲日．mld蹦resatltsshowthatASODNcoulddownregulattheexpressionlevelseyclinDlmRNAandproteinbyRT-PCRmethodand