菟丝子黄酮干预雷公藤多苷所致雄性幼鼠睾丸组织损伤的实验研究

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1、菟丝子黄酮干预雷公藤多苷所致雄性幼鼠睾丸组织损伤的实验研究【摘要】目的观察临床常规剂量雷公藤多苷(GTW)对幼年大鼠的生殖损伤，并探讨菟丝子黄酮、六味地黄丸对其睾丸组织损伤的干预作用及性成熟后生育能力的影响。方法雄性3周龄SD幼鼠72只，随机分为4组即空白组、雷公藤多苷组(多苷组)、六味地黄丸+雷公藤多苷组(六味组)、菟丝子黄酮+雷公藤多苷组(黄酮组)，每组18只;GTW按9mg/(kg·d)，六味地黄丸及菟丝子黄酮均按每日10g生药折算给药;12周后，前12只大鼠处死检测睾丸病理、TUNEL法检测生精细胞凋亡，余6只雄性大鼠按1∶1与成年雌性大鼠合笼，记录雌性大鼠受孕及产仔

2、情况。结果(1)空白组睾丸组织病理正常，多苷组睾丸组织中曲细精管腔内上皮变薄，细胞层次紊乱，精原细胞、精母细胞明显减少，精子细胞及精子减少更加明显，六味组与黄酮组病理改变较多苷组为轻;(2)生精细胞凋亡方面，多苷组生精细胞凋亡最多，六味组及黄酮组次之，正常组最少，各组与多苷组相比差异均有统计学意义(P<0.05);(3)精原细胞及初级精母细胞数量方面，多苷组细胞数量减少最明显，六味组及黄酮组次之，正常组细胞数量最多，各组与多苷组相比差异均有统计学意义(P<0.05);(4)多苷组对应的雌鼠受孕率最低，黄酮组与六味组次之。结论常规剂量雷公藤多苷对幼年雄性大鼠具有一定

3、的生殖损伤，其损伤较文献报道稍轻，菟丝子黄酮、六味地黄丸对其所造成的生殖损害具有一定的干预作用。11【关键词】雷公藤多苷/副作用;睾丸/并发症;生殖/病因学;菟丝子黄酮/治疗应用;六味地黄丸/治疗应用;大鼠;动物，实验　雷公藤多苷(glycosidestripterysiumofwilfordiihook.f.，GTW)是目前临床上常用的中成药制剂，广泛应用于治疗肾小球疾病、风湿性疾病、系统性红斑狼疮、银屑病、肿瘤、器官移植等[1]，由于部分医家过分担心其生殖损伤，致临床应用出现较大分歧。本实验以幼年大鼠为研究对象，初步观察临床常规剂量GTW对幼年大鼠睾丸组织损伤、睾丸生精细

4、胞凋亡及发育成性成熟大鼠后生育能力的影响，并研究菟丝子黄酮、六味地黄丸对其生殖损伤的干预作用。　　1材料与方法　　1.1实验动物雄性3周龄SD幼年大鼠72只，清洁级，体质量50g左右，购于河南省实验动物中心。合格证号：0001993，基础饲料为实验鼠全价颗粒饲料。　　1.2实验药物(1)GTW药粉：江苏美通制药有限公司提供，每克药粉相当于生药1g;(2)六味地黄丸：仲景牌，河南宛西制药有限公司生产，每8丸相当于原生药3g，生产批号：070621;(3)菟丝子黄酮：由陕西昂威生物医药科技有限公司提供，生产批号：20070914。11　　1.3实验主要试剂及仪器(1)试剂：细胞凋

5、亡检测试剂盒：由武汉博士得生物技术公司提供，批号：200802。(2)仪器：石蜡切片机：德国Leica，型号RM2245;Olympus光学显微镜：日本产，型号CX41。(3)Leica图像采集系统：德国产，型号DFC420C，配套LeicaQwinplus图像采集软件。　　1.4实验方法　　1.4.1实验动物分组3周龄SD雄性幼鼠72只(因雄性大鼠生殖功能成熟大约在9周，3周龄大鼠尚处于生殖发育期，此研究模拟儿科临床用药时间，故选择3周龄幼鼠)，22～26℃的清洁级动物室(河南省药检所)中自由进食饮水，适应1周后，按体质量随机(将大鼠称重后按重量从大到小排序，第一轮4只正序

6、选择，第二轮4只倒序选择，以此循环)分为4组：空白组、雷公藤多苷组(多苷组)、六味地黄丸+雷公藤多苷组(六味组)、菟丝子黄酮+雷公藤多苷组(黄酮组)，每组12只用于病理检测、其余6只用于生育能力研究。　　1.4.2给药剂量及方法动物大鼠用药剂量根据大鼠与人的换算公式进行换算[2]。(1)空白组：灌服0.5%羧甲基纤维素钠(CMCNa)，按5mL/kg每日灌胃1次。灌服时GTW与其他药物间隔1h，实验期间每周称重1次，调整给药量。(2)多苷组：GTW药粉，0.5%CMCNa液配制成每0.5mL含生药0.9mg的混悬溶液，按511mL/kg灌胃，每日1次，即9mg/(kg·d

7、)，相当于人1.5mg/(kg·d)。(3)六味组：GTW用量同上。六味地黄丸用高速万能粉碎机粉碎，粉碎后研细面。0.5%CMCNa配制成0.5mL含生药0.1g的溶液,即1g/(kg·d)，相当于生药每人每日10g。(4)黄酮组：GTW用量同上。菟丝子黄酮使用0.5%CMCNa配制成每0.5mL含黄酮0.01g(生药0.1g)的溶液，按5mL/kg每日灌胃1次，即0.1g/(kg·d)，相当于生药每人每日10g。　　1.4.3实验动物的处理给药12周后，每组均取编号前12只大鼠，于末次给药1h后称