菟丝子黄酮干预雷公藤多苷所致雄性幼鼠睾丸组织损伤

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1、菟丝子黄酮干预雷公藤多苷所致雄性幼鼠睾丸组织损伤【摘要】目的观察临床常规剂量雷公藤多苷(GTCNa液配制成每0.5mL含生药0.9mg的混悬溶液，按5mL/kg灌胃，每日1次，即9mg/(kg·d)，相当于人1.5mg/(kg·d)。(3)六味组：GTCNa配制成0.5mL含生药0.1g的溶液,即1g/(kg·d)，相当于生药每人每日10g。(4)黄酮组：GTCNa配制成每0.5mL含黄酮0.01g(生药0.1g)的溶液，按5mL/kg每日灌胃1次，即0.1g/(kg·d)，相当于生药每人每日10g。　　1.4.3实验动物的处理给药12周后，每组均取编号前1

2、2只大鼠，于末次给药1h后称重，乙醚麻醉，取一侧睾丸放入Bouin固定液中，待观察睾丸组织形态学改变。每组其余大鼠于末次给药1h后分笼喂养，每笼1只，同时放入成年雌性大鼠1只，15d后取出雄性大鼠处死(大鼠的性动周期为3～5d，故可经历3～5个周期)，观察雌鼠反应，注意有无受孕、产仔等情况，观察时间至雌雄分开后26d(大鼠孕期约10d左右)。　　1.5观察指标　　1.5.1睾丸组织形态学观察睾丸组织固定，石蜡包埋，制作切片，每个标本制备睾丸组织切片1张，苏木素伊红(HE)染色。光镜下观察各组睾丸组织结构、有无炎症、充血、水肿等病变;观察各组睾丸曲细精管内各级生精细

3、胞数量、细胞层次及精子数量等变化。　　1.5.2睾丸组织曲细精管中生精细胞计数每个睾丸制备HE病理切片1张，显微镜下随机选取5个曲细精管，Leica图像采集系统采集图像，Imageproplus6.0图像分析系统计数精原细胞、初级精母细胞数量。　　1.5.3睾丸组织曲细精管中生精细胞凋亡检测采用TUNEL法检测生精细胞凋亡，细胞核呈棕黄色为阳性细胞，即凋亡细胞。光镜下观察，Leica图像采集系统采集图像，每张切片随机采集20个曲细精管，Imageproplus6.0图像分析系统计数每个曲细精管的阳性细胞数，求取平均值，每组计数3个睾丸组织共3张切片。　　1.5.4

4、雌性大鼠受孕率、产仔总数计算详细记录每组雄性大鼠所配对的雌性大鼠是否产仔、产仔时间、产仔的数量。计算各组对应的产仔率、平均每胎产仔数。　　1.6统计学方法采用SAS6.12软件进行数据分析。计量资料以±s表示，行ANOVA、SNKq、直线相关分析等检验。计数资料采用χ2检验、多样本率npar1waywilcoxon检验。检验标准以P<0.05为差异有统计学意义。　2结果　　2.1睾丸组织形态学改变　　2.1.1空白组实验大鼠睾丸曲细精管呈圆形或卵圆形，曲细精管内含众多精子。生精上皮规则圆形，排列紧密，结构清楚，层次分明，精原细胞圆而规则，紧贴在曲细精管的基

5、底膜。各期生精细胞排列整齐、紧密、有序，层次分明。支持细胞(Sertoli细胞)，不规则，发育良好。睾丸间质细胞(Leydig细胞)位于曲细精管之间的疏松组织内，细胞分布聚集，成圆形或多边形，发育良好。　　2.1.2多苷组大鼠睾丸曲细精管腔内上皮变薄，细胞层次紊乱，精原细胞、精母细胞明显减少，精子细胞及精子减少更加明显，Sertoli细胞分布稀疏，某些生精细胞肿胀变性，偶见间质轻度水肿，Leydig细胞病理变化不太明显。　　2.1.3六味组及黄酮组大鼠睾丸曲细精管上皮略变薄，细胞层次尚分明，精原细胞、精母细胞、精子细胞均有所减少，但减少程度均不如多苷组明显。间质细

6、胞数目及发育未见明显异常，两组之间区别较小。　　2.2睾丸组织曲细精管中生精细胞计数情况见表1。表1各组睾丸曲细精管中精原细胞及初级精母细胞数量(±s)　　表1结果表明，空白组睾丸曲细精管中精原细胞及初级精母细胞数量最多，多苷组数量最少，多苷组与其他各组相比差异均有统计学意义，说明使用GT].2版.北京：人民卫生出版社，2006：33.　　[3]黄真,毛庆秋.雷公藤多苷的临床应用、不良反应及预防[J].药品评价,2005，2(2)：125127.　　[4]王淑云,张建伟,胡延忠,等.雷公藤对男性肝肾功能和精液酸性磷酸酶水平的影响[J].中国药科大学学报,1994,

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8、加味组方对