大鼠β防御素12的cDNA克隆及黄芪多糖对其表达调节作用的实验研究

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1、兰州医学院硕士学位论文大鼠β-防御素-1,2的cDNA克隆及黄芪多糖对其表达调节作用的实验研究姓名：李萍申请学位级别：硕士专业：病原生物学指导教师：景涛2003.6.1≯’514853大暴昼。防锋素．1，2的cDNA亮囊及羹甍多糖对其囊选谲节作焉的实验研究摘要目的；完成昼．防御素．1，2基因的eDNA克隆，探讨黄芪多糖对大鼠呼吸系统防御素表达的调节作用。方法：跌GenBank检索到Wistar大鬣13．防御索。1，2eDNA序列，据此设计两对特异引物，采用逆转录。聚合酶链反应在Wistar大鼠气管、

2、鹏组织的总RNA中，分别扩增其特异cDNA片段，然后进行克隆扩增、限制性内切酶谱分析鞫DNA序歹

3、j测定；将6穆只健康Wistar大鼠随机分成对照组和实验组，每组30只。实验组经2．25％黄苠多糖溶液灌雹；对照组以等量生理盐水州s)灌臀，分剐乎第0夺时、第1天、第3天、第5天、第7天处死，提取其肺组织总RNA，用RT-PCR法检测大鼠B．防御素．2基因的袭达变化。结果：在大鬣气管、臃组织分别扩增斑长度为272bp，217bp的eDNA片段，其赙PCR产物经测序分析证明分别是大鼠13．防御素．1cDN

4、A与大鼠B．防御素．2cDNA。黄芪多糖实验组p．防御素．2mRNA的表达高于对照组(P

5、REGULATIONOFrBD．2GENEEXPRESSIONBYASTRAGALUSPOLYSACCHARmESABSTRACTPurpose：TofulfilthecloningofratB-defensin(rBDl-1,2cDNAintrachea，lungtissueandtoexploretheregulationofrBD-2geneexpressioninlungtissuebyAstragsdusPolyr,accharides(APS)．Methods：Theexperiment

6、wasmadeoftwoparts．Inthefirstpart，thetotalRNAWasisolatedfromrattracheaandlung．TherBD-1，2cDNAfragmentswereobtainedbyRT-PCRamplicationwithspecificprimersrespectively．TheRT—PCRproductswereclonedinpGEM·TEasyvector．RestrictionendonucleasepaRemanalysisofthere

7、combinantplasmidandDNAsequencingwereperformed．Inthesecondpart，sixtyWistarratsweighing1509wererandomlydividedintothecontrolgroupandtheAPSgroupwith30ratseach．InAPSgroup，eachwasdealtwith2．25％APSig：ThesamedoseofNSwasgiventotheratsofthecontrolgroup．Lungswer

8、eharvestedimmediately,andsubsequentlyon1n，3一，5mand7mdayrespectivelyafterstimulation．TotalRNAWasextractedfromtrachealandpulmonarytissueandrBD-2wasmeasuredbyRT-PCR．口-如tinwasusedasintemalstandard．Results：TheeDNAsequenceandtheorientationoftheinsertwereconf

9、irmedbyDNAsequencing．TherBD-2mRNAexpressioningroup，showedamarkedincreaseascomparedwiththatinthecontrolgroup，andalsoon3rdday,comparedwithl或，5廿land7出dayafterstimulation．Conclusions：TheseresultsindicatedthatrBD-1，rBD-2geneswereexpressedint