神经干细胞定向分化与移植治疗帕金森病的实验研究

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1、重庆医科大学博士学位论文神经干细胞定向分化与移植治疗帕金森病的实验研究姓名：郑敏申请学位级别：博士专业：药理学指导教师：王亚平2003.5.1鬟痰医辩大学搏圭学髋论文缩写NSCCNSbFGFEGFFBSNSEGfiAPGalCBrdUPDDAPI6—0嚣转AApoDADOR～CHVAT}壬D解AAHGFEP0IL—lR孓PC酞ICCP--L--LHPLC蹬PrpmEd英文缩写一览表英文名称rteuralstemcellscentralnervoussystembasicfibroblastgrowthfactorepidermalgrowthfactorfetalbovineserumne

2、uronspecialenolaseglialfibrillaryacidicproteingalactocerebrosideCbromodeoxyuridineParkinsondisease4t，6-diamidino-2-phenylindole6-hydroxydopamineApomorphineDopamineHomoprotocateehuicacidhomovanilticacidtyrosinehydroxylasedopaminetransporterascorbicacidhematopoietlcgrowthfactorErythropoietininterleu

3、kin-1revel"setranscriptionpolymemsechainreactionimmunocytochemistrypoly-I-lysinehi曲performanceliquidchromatographygreenfluorescenceproteinRevolutionsperminuteEmbryonicday中文名称享枣经于绥庭中枢神经系统碱性成纤维细胞生长因子表皮细胞生长因子胎牛血清耪经募特买蝗爝黪纯錾胶质纤维酸霞爨白半乳糖脑苷脂C5溴脱氧尿嘧啶核昔帕金森病4，6．二乙酰綦m2-苯基晖

4、曝6羟基多邑阿朴吗唯多巴胺二羟苯乙酸高香草酸酪氨酸羟纯酶多巴胺转运予抗坏

5、血酸造血生长因予促红细胞生成索自细胞分素．1爱转录多聚藜凌式发痘免疫细胞化学多聚赖氨酸高效液相色谱绿色荧必蛋巍每分镑转数胚胎天数重庆医科大学博士学位论文第一部分神经干细胞的分离培养、扩增摘要目的：神经干细胞(姒捌samlcell，NSC)的发现是神经生物学领域的最重要进展之一。NSC不仅对于中枢神经系统发育成熟后不挑战，为研究神经发生、神经系统遗传病的发病机制提供了系统损伤修复和退行性病变的治疗带来了新的希望。NSC提出了为神经究的基础，本实验目的在于通过培养了解其生物学特性，为深入研究其体内外分化奠定基础y’方法：采用体外无血清培养和增殖刺激因子的作用，分离培养人和大鼠胎脑NSC。通过单

6、细胞克隆实验和体外长期传代培养扩增和冻存复苏检测其自我更新能力、增殖能力和生物学特性稳定；免疫细胞化学检测NSC特征性标志nestin表达和分化为神经元和胶质细胞能力；BrdU掺入实验检测细胞增殖状态：通过克隆和细胞计数比较EOF、bFGF对鼠NSC增殖刺激作用，对LIT在人NSC培养中的作用进行探讨。f结果：体外无血清选择性传代培养，获得的NSC能分化为神经细胞和神经胶～乜一质细胞，具有多向分化能力；有很强的自我更新能力，经体外20次传代培养后仍然具有克隆形成能力；NSC表达nestin，部分细胞处于增殖活跃期；NSC扩增迅速；传代培养的NSC性能稳定，经长期培养和冻存复苏后保持NSC特

7、点；联合运用EGF、、／bFGF对NSC增殖作用较单用强；LIF对人NSC长期培养扩增有明显促进作用。，结论：建立了体外培养人和大鼠NSC的方法，培养的NSC表达ncstin，有自我更新、多向分化的特点，通过培养细胞大量扩增。EGF、FGF联合作用促进大鼠NSC增殖，LIF能促进人NSC培养扩增。关键词：神经干细胞，蛾更新，多向分化，扩螬＼＼2里壅垦型奎鲎蔓主兰垡笙奎PartOneIsolationandExpansionofNeuralStemCellAbstractBackgroundsandobjectivesFoundofneuralstemcellisthemostimporta

8、ntprogressinneurobiology．Itnotonlychallengethetraditionalun-regeneratableopinion，provideidealvectorofstudyonneuro—developmentandmechanismofneurogenesis，butalsobringhopetothetreatmentofmanyneuraldisease．Cultureand