木糖苷酶的酶学性质分析及定向进化

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1、分类号：密级：华中农业大学硕士学位论文木糖苷酶的酶学性质分析及定向进化CharacterizationandDirectedEvolutionoftheXylosidase研究生：学号：指导教师：指导小组：专业：生物化学与分子生物学获得学位名称：理学硕士黄宗庆2010304110137刘子铎教授罗美中教授洪玉枝副教授吴高兵讲师研究方向：酶分子工程获得学位时间：2013年06月华中农业大学生命科学与技术学院二O一三年六月华￡扣农q之大学学位沦文独到性声l粥及馒用授权⋯》黧。尽裁嚣窖知．除≯tc；：特别毒瓢Z学篓嵇缓露黪j宣万分．滏≮巾誊毽≥箕愆太曼给发轰或撰写遥的跨瓷找

2、袋，巍薯釜会冬移‘≮。参。}j嚣波友掌戎菸色黢曹，毳臻蛹学瞧或泛》内使瘸过翰季{糕．捂芬教簿对照迸：}j。爹瓮、≮{瓷⋯黧工撂的l笺毒震本谤瓮j嚣熬约囊畚j、、竞金。j解j垂审农基火学装j一缘鸯，。缱：i≯雾经沦又敏怒垤，嚣‘挲璺、藏菇羧露掌皎娶隶提交学位沦，≮的印域本移i巍-7缀参：学援露援簿季嶷交跑袋昀露利薮秘电学j歉，著捉馁搿录捡索扣罐琵骚务，‘j；；jx蓉鬻攀j谬．笼露我蓊搓·弩疑载争段缳鸯、蠹璇掌像；琶戈。：}：太同意簪申驻逝大学霉菇t／f-,季强杰式耋一{：瑚撵落j二发袭、终强雩伐沦交鳇奎黧线鄂‘于内容，／洳Y冬覆像际合侈爰蓉霹曩第离铰．鬻p援滋交技传递和

3、交换暇务、?文jj敷一缳留羟其经媒依发表论文鳇投，磐。注：保密学位论文(印涉及技术鬏镑、薄鼗秘鬻或i{=l遗专零{j等潜在鬻要文)在斛密瑶运用‘}率授毅书。陋敞瓣签名：疡窖瓴．j簧．6琏fi譬肇痨赘毫签名美璃提交倦鬻鲍沧木糖苷酶的酶学性质分析及定向进化目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．iAbstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．iii缩略语表(Abbreviations)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．vl前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．1半纤维素⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11．2木聚糖⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11．3木聚糖酶⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．31．3．1木聚糖酶的分类⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．3．2木聚糖酶的催化机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51．4木糖苷酶⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．71．4．1木糖苷酶的活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．4．2木糖

5、苷酶的定位⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．4．3木糖苷酶的酶学性质⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．4．4木糖苷酶的基因工程⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．111．4．5木糖苷酶的作用模式和协同作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．121．4．6木糖苷酶酶家族⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．131．5木糖苷酶的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．6糖昔水解酶的作用模式转换⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯201．7本研究的意义和目的⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯222材料与方法⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯232．1材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯232．1．1菌株与质粒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．232．1．2仪器设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．232．1．3试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯242．1．4培养基⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．242．2木糖苷酶基因gsxyn克隆⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．242．2．1扩增木糖苷酶基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯．242．2．2扩增产物回收、酶连和转化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．25l华中农业大学2013届硕士研究生学位论文2．2．3扩增gsxyn基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。262．2．4木糖苷酶产物回收、酶切⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．262．2．5酶连和转化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．272．3木糖苷酶GSxyn的表达与纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯282．3．1质粒pGEX一6p-gsxyn转化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．282．3．2木糖苷酶GSxyn的诱导表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯