MicroRNA494过表达与RNA干扰抑制survivin基因诱导PC3细胞凋亡的比较

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1、苏州大学学位论文独创性声明本人粼重声冁：所提交的学位论文是本大禚导师的指导下r独立进露醭究薹终蹶取得的成暴a除文审已经注明孳l用的赡容辩，零论文举含其镶个久或集体已缀发表藏撰写过麓研究成果，也零含为获褥苏媸爽攀或其它教育枫梅的学缒诞豢露使用过的材料々对本文的研究俸邂重要贡献的个人和集体，均醛在文中以明确方式标明。本人承担零声爨的法律责任。论文作者签名：蒌礼乎黯期：砒”渺2S苏州大学学位论文使用授权声隳零入竞全了解苏建犬攀关于收集、保存释健耀学健论变的援定，鼷：学经论囊著作权娲属蒸州炎学。本学位论文电子文档的纛容释纸矮论文熊内容穗一致。苏媸太学有权露阑豢匿书馆、中鼷社科婉文献

2、信息情摄审心、中糜辩攀技术倍感研究所(含露秀数据电予出版裢)、中国学本期翻(光盘版)毫予杂意社送交本学位论文的复印件和瞧子文楼，允许论文被查阅和借闷，可以采用影印、缩印或其健复制手段保存帮汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据簿进行稔索。涉密论文豳本学位论文属在——年一舞鳃密蜃逑阁本耀定心非涉密论文口谂文作者签名_，。．．墨．窒尘至。．瑟尊孵签名：匿期：猡f2一骅”25本文由江苏省自然科学基因资助项目(BK2008167)与苏州市社会发展项目(SS08043)资助。目录弓I言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯。1第一部分survivin相关microRNA．494在PC．3及R、vPE．1细胞株中的验证⋯⋯。6材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．6讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15第二部分Ad．pre．microRNA．494腺病毒载体的构建及其联合Ad—survi、，inshRNA载体诱导Pc．3细胞凋亡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．16材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16重组腺病毒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44综述：睾酮与前列腺癌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．45中英文对照缩略词语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．53攻读学位期

5、间公开发表的文章⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．54致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55MicmI斟A．494过表达与RNA干扰抑制survivin基因诱导Pc．3细胞凋亡的比较中文摘要研究背景及目的：前列腺癌(Pca)是男性泌尿生殖系统最常见的肿瘤之一。我国前列腺癌的发病率在1993年为1．71人／10万人口，1997年升至2．0人／10万人口，至2000年为4．55人／10万人口，呈逐年上升趋势。前列腺癌的发病机制错综复杂，涉及大量癌基因及抑癌基因的表达变化和众多相互交叉的细胞信号通路，这为寻找安全

6、理想的前列腺癌诊疗方法带来了巨大挑战。因此，寻找一种安全有效的前列腺癌治疗方法一直是近年来前列腺癌研究的主要方向之一。近年多项研究表明，小分子RNA(microRNA／siRNA)与癌基因、抑癌基因的相互关系与前列腺癌的发生、发展密切相关。基因治疗是近年来肿瘤防治的重要研究领域，寻找有效的目的基因，旨在更有效诱导肿瘤细胞凋亡。本课题研究过表达microI必A．494腺病毒载体与负载suⅣivinsl瓜NA腺病毒载体对survivin的抑制作用和对前列腺癌PC．3细胞株的凋亡诱导效应，探索前列腺癌基因治疗的新方法。方法：应用生物学软件TargetScan5．2预测hsa．mi

7、croI埘A．494成熟体与survivinmRNA配对结果。实时荧光定量PCR法(real．timenuorescencequantitative．PCR)分析人前列腺上皮细胞株RWPE．1及前列腺癌细胞株PC．3中microRNA．494的上下调情况，根据分析结果与相关文献报道构建过表达腺病毒载体Ad_pre．microIⅢA．494(简称Ad一494，阴性对照Ad一2)，同时联合本科室已构建的IⅢA干扰腺病毒Ad．suⅣivins11IⅢA(简称Ad．sur，阴性对照Ad．1)分别感染HEK．293A细胞，在