猕猴胚胎干细胞神经谱系分化过程中mRNA表达谱和miRNA表达谱分析

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1、图日中国科学院人学UniversityofChineseAcademyofSciences硕士学位论文猕猴胚胎干细胞神经谱系分化过程中mRNA表达谱和miRNA表达谱分析日团囝曰培养单位：2013年s月HUIIIIIJ480Analysisofwhole-genomemRNAandmicroRNAprof'dingsduringtheneuraldifferentiationofrhesusmonkeyembryonicstemcellsByJiShuangADissertationSubmittedtoUnivers

2、ityofChineseAcademyofSciencesInpartialfulfillmentoftherequirementForthedegreeofMasterofScienceKunmingInstituteofZoology，ChineseAcademyofScinencesMay,2013猕猴胚胎干细胞神经谱系分化过程中mRNA表达谱和miRNA表达谱分析目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．。⋯ABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．．⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．IV第一章哺乳动物神经干细胞研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。11．1体内外存在和发现的神经干细胞类型⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1．1神经上皮祖细胞(NEPs)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21．1．2玫瑰花环神经千细胞(NeuraIRosettestemceIIs；R-NSCs)⋯⋯⋯一31．1．3放射状胶质样神经干细胞(NSC瞪龙盯)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．1．4处在过渡时期的神经上皮祖细胞(It-hESNSCs)⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．1．5RG细胞(RadiaIgI．a)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．51．1．6基底祖细胞(BasaIprogenitors；BPs)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．2体外长期扩增神经千细胞的主要方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．2．1神经球培养系统(Neurospheresystem)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．2．2单层细胞贴壁培养系统(MonoIayersystems)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．91．3现阶段研究存在的不足及将来可能的研究方向⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。⋯⋯⋯

5、⋯111．3．1体外分离培养存在的问题⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．111．3．2神经千细胞领域的新发现⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。121．3．3神经干细胞领域未来可能的研究方向⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．13第二章猕猴胚胎干细胞定向分化为不同阶段的神经前体细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯152．1前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。152．2材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯162．2．1未分化猕猴胚胎千细胞的培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯．．162．2．2猕猴胚胎干细胞诱导分化成早期玫瑰花环细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．162．2．3早期玫瑰花环细胞(R—NSC)的培养与扩增⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯172．2．4神经祖细胞(NPCs)的诱导分化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。182．2．5神经祖细胞(NPCs)的长期培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．182．2．6早期玫瑰花环细胞神经图式分化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．18目录2．2．7神经祖细胞的终末分化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯192．2．8免疫细胞化学染色(ICC)

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．192．2．9逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯～212．2．10实时定量PCR(ReaI-trilePCR)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．212．3结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯232．3．1猕猴胚胎干细胞(rESC)神经分化体系的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。232．3．2早期玫瑰花环神经干细胞(R-NSCP1)的特征与鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．242．3．3后期玫瑰花环神经干细胞(R-NSCP6)和胶

8、质样神经干细胞(NPC)的特征与鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯262．3．4神经干细胞终末分化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．272．4讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．27第三章猕猴胚胎干细胞神经分化过程中mRNA表达谱及mcroR