帕唑帕尼影响肺癌表达谱和miRNA谱的联合分析和代谢研究

《帕唑帕尼影响肺癌表达谱和miRNA谱的联合分析和代谢研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R655.3学校代码：10062密级：学号：2013601116博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：帕唑帕尼影响肺癌表达谱和miRNA谱的联合分析和代谢研究TITLE:TheunitedanalysisoftheinfluenceofpazopanibuponmRNAandmiRNAtranscriptomesaswellasitsinvolvementinmetabolism一级学科：临床医学二级学科：外科学胸心外论文作者：杨帆指导教师：周清华导师组成员：尤嘉琮天津医科大学研究生院二零一六年五月分类号：R65

2、5.3学校代码：10062密级：学号：2013061116学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：帕唑帕尼影响肺癌表达谱和miRNA谱的联合分析和代谢研究TITLE:TheunitedanalysisoftheinfluenceofpazopanibuponmRNAandmiRNAtranscriptomesaswellasitsinvolvementinmetabolism一级学科：临床医学二级学科：外科学胸心外论文作者：杨帆指导教师：周清华导师组成员：尤嘉琮天津医科大学研究生

3、院二零一六年六月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关

4、部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在10年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学博士学位论文中文摘要背景和目的：肺癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一，死亡率无论在中国还是世界范围内均排恶性肿瘤的第一位,且仍呈上升趋势。在肿瘤的发生发展过程中，大多会表现一系列共有的特征，包括：持续性的增值信号、逃逸生长抑制因子、抵抗细胞死亡及永生化、激活侵袭转移和促进血管生成。针对肿瘤的血管生成，目前已经开发有针对VEGF及其受体的单克隆抗体还有帕唑帕尼等受体

5、酪氨酸激酶抑制剂等。临床前研究确认帕唑帕尼等酪氨酸酶抑制剂具有明确的抑制肿瘤增殖、内皮细胞成管和抑制移植瘤增殖的作用，但临床研究发现其总体生存期等指标较对照组提升不明显，尚需对帕唑帕尼等抑制剂的作用机制和细胞耐受反应进行深入的研究。方法：(1)本研究选择多种非小细胞肺癌细胞系A549、H460、L9981和YTMLC-90作为实验对象。(2)应用MTT法探究帕唑帕尼对个细胞株合适的干预剂量范围和时间。(3)利用流式细胞术、划痕实验、transwell侵袭实验探究帕唑帕尼对肺癌细胞周期分布、迁移及侵袭能力的影响。(4)提取10μM帕唑帕尼干预组和

6、溶剂对照组帕唑帕尼的总RNA进行表达谱和miRNA谱的芯片检测，筛选出各细胞株之间变化趋势相同的差异表达基因及miRNA。(5)应用realtimePCR筛选和验证芯片结果；利用westernBlot验证帕唑帕尼能上调PCK2表达水平。(6)构建PCK2-pEGFP过表达质粒并通过Westernblot验证其过表达效果。(7)设计以PCK2为靶点的siRNAs，并通过realtimePCR鉴定其干扰效率。(8)通过siRNAs和过表达质粒下调、上调PCK2水平，流式细胞术检测PCK2与细胞周期间的关系。(9)通过siRNAs下调PCK2水平和帕

7、唑帕尼诱导PCK2上调研究培养环境中葡萄糖和乳酸的动态变化。I天津医科大学博士学位论文(10)通过过表达质粒上调PCK2研究其与帕唑帕尼抑制肺癌增殖的关系。结果：(1)MTT方法检测帕唑帕尼对A549、H460、L9981和YTMLC-90细胞在48小时的IC50分别为15.913±2.57μM、36.161±4.53μM、9.81±1.34μM和11.448±3.28μM；在96小时的IC50分别为11.693±0.79μM、13.472±1.3μM、5.395±1.38μM、7.001±3.33μM。(2)流式细胞术显示帕唑帕尼在0-10μ

8、M范围内呈剂量依赖性增加A549、H460和L9981细胞G0/G1期的比例。(3)划痕实验显示帕唑帕尼聚能你抑制A549和L9981细胞的迁移能力，