前列腺癌冷冻治疗后高迁移率族蛋白B1影响DC凋亡的机制研究

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1、分类号：R737．25密级：学位类别：科学学位囹专业学位口◇学校代码：学号：学科门类：又滓酱科矢警彳

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3、eAk鞠NlV耋RSl-Inr硕士学位论文MLASTER’SDISSERTATION论文题目：前列腺癌冷冻治疗后高迁移率族蛋白Bl影响DC凋亡的机制研究TITLETheMechanismofHighMobilityGroupProteinB1InducingApoptosisofDendriticCellsWhichwasReleasedfromProstateCanceraftercryoablation一级学科：临床医学二级学科：肿瘤学论文作者：胡萍指导教师：郭志教

4、授天津医科大学研究生院二。一三年五月9铊嗡如；量学圳加医学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：埠日期：为产y月弘日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家

5、有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密囱。(请在相对应的方框内打“、／”)学位论文作者签名：盏!l!鳘日期：≯以年5月卜日导师签名：_二仁日期：≯t多年岁月弘日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的探讨前列腺癌细胞系氩氦冷冻消融处理后高迁移率族蛋白B1(highmobilitygroupproteinB1，HMGBl)I拘释放规律，以及HMGBl诱导异体外周血来源树突状细胞(dendriticcell，DC)凋亡的分子机制。材料和方法前列腺癌细胞系PC．3、DU一145体外培养，氩氦冷冻消融系统(Endocare氩氦冷冻系统，美国，直

6、径1．7mm冷冻器)冻融肿瘤细胞，收集冷冻坏死细胞上清液，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测冷冻处理前后肿瘤细胞上清液中HMGBl的浓度。采集前列腺癌患者新鲜外周血(抗凝)，应用Ficoll淋巴细胞分离液，贴壁方法分离出单个核细胞(PBMC)，利用重组人粒细胞．巨噬细胞集落刺激因子(rhGM．CSF)、重组人白介素4(rhlL．4)体外诱导并培养，获取幼稚DC细胞(iDC)。流式细胞仪测定肿瘤细胞冷冻坏死液干预前后的DCs表面TLR．2和TLR-4受体表达率；预先使用TLR-2／TLR-4封闭抗体处理iDC，随后与肿瘤细胞冷冻坏死液在体外适宜培养条件下共培养，流式细胞术测定DCs凋亡率。

7、结果1．PC．3细胞系的ELISA结果：1×105／ml组、1×106恤l组、1×10。7／ml组PC．3细胞培养基中HMGBl浓度分别为(65．78+4．57)ng／ml、(96．73+7．64)ng／ml、(137．73+13．37)ng／ml，冷冻消融后上清液中HMGBl浓度为(150．88+6．78)ng／ml、(187．34-5．69)ng／ml、(285．24-27．45)ng／ml，差异具有统计学意义(P

8、．25)ng／ml、(45．784-0．13)ng／ml、(66．82+0．18)ng／ml，冷冻处理后上清液中HMGBl浓度上升至(58．474-0．84)ng／ml、(98．14-4．62)ng／ml、(157．594-32．89)ng／ml，差异具有统计学意义(P

9、亡率：肿瘤细胞冷冻坏死液与DCs共培养前后，DC细胞凋亡率(5．25+0．46)％Vs．(73．56+0．90)％；TLR．2、TLR．4抗体封闭后，冷冻坏死细胞液诱导DCs凋亡率(38．5+8．61)％Vs．(56．85+7．14)％，仔kO．05)。结论1．流式细胞术检测前列腺癌细胞氩氦冷冻消融后的死亡形式，显示大部分细胞呈碎裂坏死状态。2．ELISA检测冷冻消融前后肿瘤细胞上清液中HMGBl的浓度，结果显示：前列腺癌细胞冷冻消