维药异常黑胆质成熟剂总黄酮对belfu细胞株多药耐药性及mrna表达的影响

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1、作者：玛依努尔?艾力,哈木拉提?吾甫尔,阿不力孜,伊力哈木【摘要】 目的研究异常黑胆质成熟剂总黄酮对肝癌bel/fu细胞株多药耐药性(mdr)及mrna表达的影响。方法逆转录聚合酶链式反应法检测细胞内mdr1、mrp、gst-π、topo?αmrna的表达。结果异常黑胆质成熟剂总黄酮可抑制人肝癌bel/fu细胞株mdr1mrna的表达,提高topo?αmrna水平。结论异常黑胆质成熟剂总黄酮抑制mdr1mrna的表达、提高topo?αmrna水平是其逆转肝癌mdr的机制。【关键词】 维药；bel/fu细胞株；多药耐药性；逆转录聚合酶链式反应法；异常黑胆质成熟剂总黄酮   　　abst

2、ract：objectivetostudytheeffectofabnormalsavdamunziq(asmq)onmdrandexpressionofmrnaofbel/fucellline.methodsseveralgenesexpressionincludingmdr1,mrp,topoiiαandgst-πwereanalyzedbyrt-pcr.resultsasmqhasbeenfoundtodown-regulatemdr1geneandsimultaneouslyup-regulatetopo?αmrna.conclusionasmqcanreversethedr

3、ugresistanceagainst5-fuinbel/fucells.inhibitionofmdr1mrnaandup-regulatetopo?αmrnamaycontributetothemechanisms.  　　keywords：uighurmedicine；bel/fucellline；mdr；rt-pcr；asmq    本实验选用肝癌耐药细胞株bel/fu作为研究对象,对维药异常黑胆质成熟剂总黄酮(asmq)逆转肝癌多药耐药性(mdr)与相关分子机制进行了研究,旨在寻找一种新型具有mdr逆转作用的药物。　　1 实验材料 　　9700型pcr扩增仪；kodak凝胶

4、电泳成像分析系统(edas)；肝癌细胞株bel/fu(南京凯基生物公司产品)；asmq,新疆维吾尔医研究所提供；5-氟尿嘧啶(5-fu),扬州奥赛康药业有限公司产品；逆转录酶amv(gibco/brl公司)；tripure试剂(gibco/brl公司)；taq酶(宝泰克公司)；特异性引物(takara公司合成)。　　2 实验方法　　2.1 mtt法测定细胞毒   　　用0.25%胰酶消化处理对数生长期细胞,用含质量分数为10%胎牛血清的rpmi-1640培养液配成密度为3×103个细胞/ml单细胞悬液,接种于96孔培养板中,每孔体积200μl,待细胞贴壁后,分成5组。asmq组加5μ

5、lasmq,其浓度为300、320、340、350、360、380、390、400、460μg/ml；asmq＋5-fu组,在asmq组的基础上加入5μl5-fu(浓度为0.02μg/ml)；细胞对照组不加药物；5-fu组每孔仅加入5μl5-fu(浓度为0.02μg/ml)；空白组于37℃体积分数为5%的co2中培养4d后,向每孔加入50μlmtt(1mg/ml),继续培养4h,移去上清后,每孔再加入150μldmso,振荡10min后,用酶标仪测定od570nm值。用下式计算细胞存活率及逆转倍数。　　细胞存活率(%)＝ 剂量组od490平均值－空白组od490平均值 　　阴性对照组

6、od490平均值－空白组od490平均值　　逆转倍数＝逆转剂加抗癌药物组细胞死亡率抗癌药物组细胞死亡率　　2.2 药物联合应用评价　　参考文献1方法,按公式相互作用指数(cdi)＝ab/(a×b)两药计算,ab为cdi联合应用组与阴性对照组的比值,a和b是药物单独作用与阴性对照组的比值,当cdi<1时,两药有协同作用。　　2.3 rt-pcr测定mdr相关基因   　　将bel/fu细胞置于含10%的小牛血清rpmi-1640中,于37℃的体积分数为5%的co2环境中培养,细胞密度为3×104个/ml。分为bel27402细胞对照组；bel/fu细胞＋390μg/mlasmq用药组,

7、分别于24、48、72、96h测定细胞mdr相关基因表达。应用trizol体系提取rna,rt-pcr实验按常规方法进行,cdna在－20℃保存备用。   　　pcr分析：mdr1、mrp、gst-π、topo?α引物及内对照物β-actin见表1。反应条件：于94℃进行3min预变性,于94℃进行30s变性,于57℃进行45s退火,于72℃延伸1min,再于72℃延伸10min并循环30次,用质量分数为115%的琼脂糖进行凝胶电泳分析并照像。利用凝胶电泳