维药异常黑胆质成熟剂总黄酮对bel-fu细胞株多药耐药性及mrna表达的影响

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1、维药异常黑胆质成熟剂总黄酮对Bel/Fu细胞株多药耐药性及mRNA表达的影响玛依努尔·艾力,哈木拉提·吾甫尔,阿不力孜,伊力哈木【摘要】目的研究异常黑胆质成熟剂总黄酮对肝癌Bel/Fu细胞株多药耐药性(MDR)及mRNA表达的影响。方法逆转录聚合酶链式反应法检测细胞内MDR1、MRP、GST-π、TopoⅡαmRNA的表达。结果异常黑胆质成熟剂总黄酮可抑制人肝癌Bel/Fu细胞株MDR1mRNA的表达,提高TopoⅡαmRNA水平。结论异常黑胆质成熟剂总黄酮抑制MDR1mRNA的表达、提高TopoⅡαmRNA水平是其逆转肝癌MDR的机制。【关键词】维药；B

2、el/Fu细胞株；多药耐药性；逆转录聚合酶链式反应法；异常黑胆质成熟剂总黄酮　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofAbnormalSavdaMunziq(ASMq)onMDRandexpressionofmRNAofBel/Fucellline.MethodsSeveralgenesexpressionincludingMDR1,MRP,TOPOIIαandGST-πultaneouslyup-regulateTopoⅡαmRNA.ConclusionASMqcanreversethedrugresistanceaga

3、inst5-FuinBel/Fucells.InhibitionofMDR1mRNAandup-regulateTopoⅡαmRNAmaycontributetothemechanisms.　　Keyedicine；Bel/Fucellline；MDR；RT-PCR；ASMq本实验选用肝癌耐药细胞株Bel/Fu作为研究对象,对维药异常黑胆质成熟剂总黄酮(ASMq)逆转肝癌多药耐药性(MDR)与相关分子机制进行了研究,旨在寻找一种新型具有MDR逆转作用的药物。　　1实验材料　　9700型PCR扩增仪；Kodak凝胶电泳成像分析系统(EDAS)；肝癌细胞株Be

4、l/Fu(南京凯基生物公司产品)；ASMq,新疆维吾尔医研究所提供；5-氟尿嘧啶(5-Fu),扬州奥赛康药业有限公司产品；逆转录酶AMV(Gibco/BRL公司)；Tripure试剂(Gibco/BRL公司)；Taq酶(宝泰克公司)；特异性引物(Takara公司合成)。　　2实验方法　　2.1MTT法测定细胞毒　　用0.25%胰酶消化处理对数生长期细胞,用含质量分数为10%胎牛血清的RPMI-1640培养液配成密度为3×103个细胞/mL单细胞悬液,接种于96孔培养板中,每孔体积200μL,待细胞贴壁后,分成5组。ASMq组加5μLASMq,其浓度为300

5、、320、340、350、360、380、390、400、460μg/mL；ASMq＋5-Fu组,在ASMq组的基础上加入5μL5-Fu(浓度为0.02μg/mL)；细胞对照组不加药物；5-Fu组每孔仅加入5μL5-Fu(浓度为0.02μg/mL)；空白组于37℃体积分数为5%的CO2中培养4d后,向每孔加入50μLMTT(1mg/mL),继续培养4h,移去上清后,每孔再加入150μLDMSO,振荡10min后,用酶标仪测定OD570nm值。用下式计算细胞存活率及逆转倍数。　　细胞存活率(%)＝剂量组OD490平均值－空白组OD490平均值　　阴性对照组O

6、D490平均值－空白组OD490平均值　　逆转倍数＝逆转剂加抗癌药物组细胞死亡率抗癌药物组细胞死亡率　　2.2药物联合应用评价