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1、维吾尔药异常黑胆质成熟剂总黄酮逆转肝癌细胞耐药性的作用论文.freelL,其浓度为390μg/mL时对细胞无明显的杀伤作用,逆转倍数为7.8,与抗癌药物5-Fu有协同作用,CDI为0.89。集落形成实验从形态上证实ASMq逆转MDR作用,随ASMq浓度的加大集落逐渐变小。结论ASMq对肝癌耐药细胞株Bel/Fu细胞多药耐药有逆转作用。【关键词】维吾尔药；异常黑胆质成熟剂总黄酮；肝癌；多药耐药性Abstract：ObjectiveToinvestigatethereverseeffectoftheextractedsolution
2、ofuygurmedicineASMqonthelivercancerdrug-resistancecelllineBel/Fuinvitro.MethodsMTTassayinetheIC50of5-FuonBel/Fucelllineandthereversemultiplesofthedrug-resistancebeforeandafterASMqtreatment.TheconcentrationinethefoldreversalofASMq.Bycloneformingtexttodeterminetherever
3、saleffectondrugresistanceofBel/Fucellline.ResultsTheIC50valueofASMqcrudeextractL.ASMqat390μg/mLconcentrationingsizebecamesmallerplyedicine；ASMq；livercancer；multi-drugresistance肝癌在我国是多发肿瘤之一。多数肝癌发现时已经是中晚期,因失去手术机会,化学药物治疗为最常用的治疗方法。合理的化疗方案能最大限度发挥其细胞毒作用。但是,有些肝细胞癌在经历了最初有效化疗
4、后,最终难免复发,.freela公司产品；胰蛋白酶,Gibco公司产品；胎牛血清,南京凯基生物公司试剂；青霉素(100万单位)、链霉素(160万单位),东北制药厂产品；MTT、DMSO,Sigma公司产品。1.2肝癌细胞株Bel/Fu复苏、培养、传代和冻存从液氮中取出冻存细胞,立即置于42℃水溶液中,使细胞快速解冻,室温1000r/min离心5min,弃上清,加入新鲜的含10%胎牛血清的RPMI1640培养液,移至培养瓶中,37℃、5%CO2孵箱中培养,以后每2～3d换1次培养液,待细胞长满后传代。当细胞长满后,倾去培养液,加入
5、0.25%胰酶消化适当时间后,弃去消化液,加入RPMI1640培养液,用吸管反复吹打,使其成单个细胞悬液,即可继续传代培养或将细胞加入冻存管中置于液氮中冻存备用。1.3ASMq的IC50测定用0.25%胰酶消化处于对数生长期细胞,用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液配成单细胞悬液,3×103细胞/mL,接种于96孔培养板中,每孔体积200μL,待细胞贴壁后,每孔加入5μLBCDC,药物终浓度分别为50、100、200、300、400、600μg/mL,每个浓度3个孔,同时设不加药对照孔、培养液空白孔、对照孔各3孔,37℃、
6、5%CO2培养4d后,每孔加入50μLMTT(5mg/mL),继续培养4h后,移去上清并用吸水纸吸干培养液,每孔再加入150μLDMSO,振荡至结晶完全溶解后,用酶标仪测定490nm的A值。1.4ASMq逆转Bel/Fu耐药性的浓度依赖实验用0.25%胰酶消化处于对数生长期细胞,用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液配成单细胞悬液,3×103细胞/mL,接种于96孔培养板中,每孔体积200μL,待细胞贴壁后,每孔加药。实验分组如下：ASMq组加5μLASMq,使其终浓度为300、320、340、350、360、380、390
7、、400μg/mL，共8个组；ASMq＋5-Fu组加5μLASMq,使其终浓度为300、320、340、350、360、380、390、400μg/mL,共8个组,每组每孔均加入5μL5-Fu(终浓度为0.02μg/mL)；细胞对照组不加药物。5-Fu组每孔仅75μL5-Fu(终浓度为0.02μg/mL)。同时设培养液空白对照。所有实验各设3个平行孔,37℃、5%CO2培养4d后,每孔加入50μLMTT(1mg/mL),继续培养4h后,移去上清并用吸水纸吸干培养液,每孔再加入150μLDMSO,振荡至结晶完全溶解后,用酶标仪测定
8、490nm的A值。1.5ASMq逆转Bel/Fu耐药的作用研究实验方法同1.4,但ASMq仅选用390μg/mL一个浓度。药物联合应用评价,两药相互作用指数(CDI)计算公式为：CDI＝AB/(A×B),根据吸光度计算,AB为两药联合应用组与对照组的比值,A、B
