热休克反应对内毒素诱导的IP10基因表达的影响

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1、热休克反应对内毒素诱导的IP-10基因表达的影响作者：梁秋娟，张华莉，涂自智【摘要】目的探讨在RAW264.7巨噬细胞中热休克反应(HSR)对大肠杆菌内毒素(脂多糖，LPS)诱导的干扰素诱导蛋白10(IP-10)表达的影响。方法RAW264.7巨噬细胞分别给予不同剂量及不同反应时间的LPS处理，并行HSR后抽提总RNA进行RT-PCR实验。结果LPS可促进RAW264.7巨噬细胞中IP-10基因的转录，具有剂量依赖性;用浓度为600μg/L的LPS刺激2h并行HSR时，IP-10的mRNA表达量最大。结

2、论HSR能促进LPS诱导的IP-10基因mRNA表达水平。【关键词】热休克反应;内毒素类;干扰素诱导蛋白10　　Abstract:ObjectiveToexploretheeffectsofheatshockresponse(HSR)onRAW264.7macrophagesinterferoninducedprotein10(IP-10)expressioninducedbylipopolysaccharide(LPS).MethodsRAW264.7Macrophagecellswereexpose

3、dtoLPSwithdifferentdosesandfordifferentreactiontime,andpartofcellsweretreatedwithheatshock.ThentotalRNAwereextractedrespectively.TheexpressionofIP-10weredetectedbyRT-PCR.ResultsLPScouldenhancethetranscritionofIP-108inRAW264.7macrophages,whichshoweddosere

4、liability.WhenRAW264.7macrophagesweretreatedwithLPSatconcentrationof600μg/Landheatshockfor2h,IP-10mRNAreachedtoapeaklevel.ConclusionHSRcanpromotethelevelofIP-10mRNAinducedbyLPS.　　Keywords:heatshockresponse;endotoxins;interferoninducedprotein-10　　热休克反应(he

5、atshockresponse，HSR)是生物细胞在高温、毒物、自由基及感染等应激原作用下以基因表达变化为特征的一种防御适应反应。作为机体重要的内源性防御机制，HRS通过激活热休克因子1(heatshockfactor1,HSF1)后直接或间接调控某些炎症介质、细胞因子的表达，如TNF-α、IL-6、IL-1β等。在以前的实验中[1]，我们用野生型和HSF1基因敲除小鼠复制内毒素血症动物模型，并进行HSR。小鼠自身免疫与炎症疾病相关基因微阵列结果显示，有多种炎症相关基因在两种小鼠中有差异性表达，其中包括

6、干扰素诱导蛋白10(interferon-inducibleprotein10，IP-10)，提示IP-10的表达可能受到HSR、HSF1的影响。在本实验中，我们主要从细胞水平探讨经LPS诱导表达的IP-10是否受到HSR的影响。如果能发现IP-10与HSR之间的关系，并进一步找到其调节机制将可能为全身炎症反应综合征(systemicinflammatoryresponsesyndrome,8SIRS)的机制研究及防治提供理论依据。　　1材料与方法　　1.1材料RAW264.7巨噬细胞株，购自上海细胞中

7、心;细胞培养箱由美国SHELLLAB生产;新生小牛血清购自杭州四季青生物工程有限公司;RPMI-1640培养基购自Gibco公司;大肠杆菌内毒素(O111B4，脂多糖，LPS)购自Sigma公司;Trizol试剂购自美国GIBCO公司;TaqDNAPolymerase、AMV逆转录酶(Takara)购自宝生物工程(大连)有限公司;PCR仪由英国Techgene生产;PCR引物甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPDH)和待测基因IP

8、-10由上海博亚生物公司合成，见表1。表1用于RT-PCR的引物　　1.2方法　　1.2.1LPS刺激细胞将细胞按1×106/瓶的密度接种在25cm2培养瓶中，用5ml含10%小牛血清的RPMI1640培养。24h后给予LPS刺激并置于37℃5%CO2培养箱中，在指定的时间收集标本。　　1.2.2热休克处理将细胞培养瓶口封闭好，置于温度为42℃的恒温水浴箱内1h，收集标本。(LPS加热休克处理组，于LPS处理的最后1h进行热休克)。8　　1