EDA在牙胚中的表达及其对人牙乳头间充质细胞的作用

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1、第四军医大学博士学位论文EDA在牙胚中的表达及其对人牙乳头间充质细胞的作用姓名：甘云娜申请学位级别：博士专业：口腔临床医学（修复学）指导教师：王忠义;陈苏民2003.5.1独创性声明秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本八声明所呈交的论文是找t，＼在导师指导下边行的研究工作及取得的研究成果。．尽我所知，除了文中特刑删以标注和致谢的地方9}，论文中不包含其他八已经发表或撰写过的研究臆累，不包含本八或他人已申请学位或其他用途使用过的成果与找一同工作的同．≤．对本研究所儆的任何贡献均已在论文中1I-了明确

2、的说明并表示了致谢申请学垃论文与资料若肓不实之处，本八承担一切相关责{壬论文作者签名：。、3+，、’。＼’日期：√ii呆护知识产权声明本八完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究三￡!存较J々碡学位期间论文工作的知识产权单位属第四军医大学本八保证毕业离校辐。霞表i2文或使用论文I1f威果时署各单位仍然为第四军医大学。j学校有权保留j差交ie文的复印件，允许论文被查闻和借闻；学较可以公布论文的全都或部钳ffj客(保密内容除9})，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文、1，、f论文作吉簦

3、各：一I·4一、。＼导师签各：i-日期第四军医大学博士学位论文中文摘要，(先天性外胚层发育不全无汗综合症(HypohidroticEctodormalDysplasia，HED)是以毛发稀少(hypotrichosis)、汗腺缺失(hypohidrosis)、全部或部分牙齿缺失(anadontia／hypodontia)为主要临床特征的一类先天性遗传性疾病。该疾病主要有3种遗传方式：x染色体隐性遗传(XLHED)、常染色体显性遗传(ADHED)以及常染色体隐性遗传(AR皿D)。其中以XLHED最为常

4、见。XLHED的致病基因EDA基因已于1996年由KeroJ．克隆成功。此后的研究表明EDA基因编码的蛋白为TNF配体家族成员。有研究表明EDA基因在小鼠的口腔上皮以及帽状期牙胚的外釉上皮中表达，EDA基因的突变可引起釉结节的发育异常，推测EDA基因在调控小鼠牙齿的形态发育中占有重要作用。但是，目前尚没有关于EDA基因在人牙胚组织和细胞中具体作用的研究。j7，本文主要通过制备EDA蛋白的多克隆抗体，借助免疫组织化学、细胞免疫荧光染色等方法对EDA蛋白在人和小鼠牙胚组织和人牙乳头间充质细胞中的表达，及

5、其过表达对人牙乳头间充质细胞一般生物学特性及EGFR表达的影响进行了研究，以探索EDA在牙胚发育中的作用。我们成功地构建了EDA基因的原核表达载体，并使其在大肠杆菌体内获得高效表达。将获得的目的蛋白免疫兔子可以产生高效价的多克隆抗体·为检测EDA蛋白在各种待测组织和细胞中的表达奠定了基础。用制备的抗体对人和小鼠牙胚组织作免疫组化研究，结果表明各个时期人和小鼠牙胚组织中均不能检测到EDA蛋白的表达。但可在颌面部的表皮、腺体、软骨中检测到EDA蛋白的表达。体外培养的人牙乳头间充质细胞则有EDA蛋白的弱表

6、达。第四军医大学博士学位论文我们还成功的构建了EDA基因的真核表达载体，并筛选出稳定转染EDA基因的人牙乳头间充质细胞，相关的研究表明EDA蛋白的过表达可以抑制人牙乳头问充质细胞的生长和碱性磷酸酶的活性，并促进其EGFR的表达。关键词：先天性外胚层发育不全无汗综合症jEDA基因人牙乳头间充质细胞，、表皮生长因子受体第四军医大学博士学位论文ABSTARCTHypohidroticEctodermalDysplasia(HED)isaninhcdtantdiseasecharacterizedwithh

7、ypo仃ichosis，hypohidrosis，anadontiaorhypodontia．Threekindsofinhoritantpatternsexist：Xlinked(XLHED)，autosomaldominat(ADHED)andautosomalrecessive(ARHED)．Amongthorn，XLHEDisthemostcommonone．ThepathogenicgoneofXLHEDiscalledEDAgene，clonedin1996byKereJ．Itbelon

8、gstotheTNFligandfamily．RecentresearchesshowthatEDAgonewasexpressedintheoralepithefialandouterenamel印ithefialofroutinetoothgerminthecapstage．MutationofEDAganewouldcausetheabnormaldevelopmentofenamelknot．So，itissupposedthatEDAgoneplayarol