micrornas在人骨髓间充质干细胞向汗腺样细胞分化中的作用研究

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1、分类号：R644学校代码：10062密级：学号：2012602501硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：microRNAs在人骨髓间充质干细胞向汗腺样细胞分化中的作用研究TITLETheeffectsofmicroRNAsonhBM-MSCsdifferentiationintosweatglandlike-cells一级学科：临床医学二级学科：外科学烧伤外科学论文作者：谭志军指导教师：付小兵天津医科大学研究生院二0一五年五月分类号：R644学校代码：10062密级：学号：201260250

2、1学位类别：科学学位□√专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：microRNAs在人骨髓间充质干细胞向汗腺样细胞分化中的作用研究TITLETheeffectsofmicroRNAsonhBM-MSCsdifferentiationintosweatglandlike-cells一级学科：临床医学二级学科：外科学烧伤外科学论文作者：谭志军指导教师：付小兵导师组成员：张翠萍天津医科大学研究生院二0一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立

3、进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适

4、用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要【研究目的】1、利用胰蛋白酶-EDTA消化液分离纯化原代培养的汗腺细胞，为下一步诱导实验做准备；2、筛选人骨髓间充质干细胞和汗腺样细胞之间差异表达的microRNAs，并利用生物信息学进行差异表达microRNAs的靶基因预测，寻找人骨髓间充质干细胞向汗腺样细胞分化的关键调控microRNAs，并初步预测其功能；3、探索microRNAs在人骨髓间充质干细胞向汗腺样细胞分化中

5、的作用。【研究方法】1、采用II型胶原酶溶液消化皮肤并分离出汗腺细胞团；2、采用胰蛋白酶-EDTA消化液分离纯化原代培养的汗腺细胞，并进行免疫组化鉴定培养的细胞，同时进行皮肤HE染色观察正常人皮肤中的汗腺形态结构；3、对成骨细胞、成脂肪细胞诱导分化液诱导后的人骨髓间充质干细胞分别进行茜素红、油红O染色，鉴定人骨髓间充质干细胞的多向分化能力。采用Transwell培养板构建人骨髓间充质干细胞和热休克汗腺细胞间接共培养诱导分化模型，并利用免疫荧光、RT-PCR和WesternBlot技术对诱导后的人骨髓间充质干细胞进行汗

6、腺细胞表面标志物的检测；4、提取人骨髓间充质干细胞和汗腺样细胞的总RNA并作纯化标记，然后进行microRNAs芯片杂交并利用生物信息学进行靶基因预测，采用实时荧光定量PCR进行芯片结果的验证，初步确定汗腺发育有关的microRNAs；5、将化学合成的特定的microRNAsmimics、microRNAsinhibitor、microRNANegativeControl分别转染人骨髓间充质干细胞并继续与热休克的汗腺细胞间接共培养诱导7天，之后采用免疫荧光、RT-PCR和WesternBlot技术检测特定microR

7、NAsmimics、microRNAsinhibitor、microRNANegativeControl转染后并间接共培养诱导的效果。【研究结果】1、经胰酶-EDTA消化液分离纯化后，去除了新生汗腺细胞周围95%以上的成纤维细胞，得到了高纯度的原代培养的汗腺细胞。I天津医科大学硕士学位论文2、人骨髓间充质干细胞诱导后汗腺细胞表面标志物CEA、CK8、CK19表达阳性。3、经过对microRNAs芯片结果对比分析，人骨髓间充质干细胞和其诱导分化来源的汗腺样细胞之间microRNAs表达水平绝对值相差2倍以上的micro

8、RNAs有68个，其中上调的有19个，下调的有49个。表达水平上调相差5倍以上的microRNAs有microRNA-132-3p、microRNA-4467、microRNA-4484、microRNA-146a-5p、microRNA-6126等5个。表达水平下调相差5倍以上的microRNAs有microRNA-708-5p、microR