高糖促进PgLPS刺激人牙龈成纤维细胞分泌炎症因子机制的初步研究

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1、分类号：R781．4密级：学位类别：科学学位团专业学位口学校代码：1062学号：2010602588学科门类：医学又坪鼍斜矢号硕士学位论文M【ASTER’SDISSERTATION论文题目：高糖促进P．gLPS刺激人牙龈成纤维细胞分泌炎症因子机制的初步研究TITLETheStudyonMechanismofHighGlucoseEnhancingP．gLPSinStimulatingHumanGingivalFibroblaststoSecrettheInflammatoryCytokines一级学科：口腔医学二级学科：口腔临床医论文作者：魏丛丛指导教师：邓嘉胤主任医师导师组成员：蒋少云吴陈炫

2、天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明lIIIIHIIIMIIIlliilliIIIIll}Y2396529本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名尬日期：B铆阳学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、

3、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密团。(请在相对应的方框内打“J”)誓等墨笔獬霉差需导师签名绳垒妥县薪7年1月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：通过体外培养获得人牙龈成纤维细胞(Humangingivalfibroblasts，HGFs)，采用高浓度葡萄糖、牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis，Pg)脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)对细胞进行刺激，酶联免疫法(Enzyme—linkedimmunosorbentassay，ELISA)检测HGFs分

4、泌肿瘤坏死因子．0【(Tumornecrosisfactor．a，TNF．0【)和白细胞介素．1p(Interleukin．1p，IL．1D)的水平，运用实时定量PCR检测Toll样受体2(Toll．1ikereceptor2，TLR2)和Toll样受体4(Toll．1ikereceptor4，TLR4)在HGFs中的表达，并用anti．TLR2和anti．TLR4单克隆抗体阻断后观察IL．1p和TNF．a水平的变化，以期初步探讨高糖对P．gLPS刺激HGFs分泌炎症细胞因子的作用及其机制，为阐明糖尿病性牙周炎的发病机制提供实验依据。方法：1．在天津医科大学口腔医院颌面外科选择第三磨牙阻生齿完

5、全埋伏、身体健康的患者5例(年龄18．25岁)，获得患者的知情同意后，在智齿拔除过程中收集牙龈。用无菌中性蛋白分散酶(DispaseII)消化分离牙龈上皮后，组织块法培养牙龈成纤维细胞，倒置相差显微镜下观察其形态及生长状况。2．采用ELISA检测高糖、P．gLPS(1I．tg／ml、10gtg／m1)和高糖／P．gLPS刺激6h和12h后细胞上清液中TNF．c【和IL．1p水平的变化，以低糖组、P．gLPS／低糖刺激组作对照。3。以高糖、P．gLPS(1lxg／ml、10p．g／m1)和高糖／P．gLPS刺激HGFs6h和12h后，采用实时定量PCR检测TLR2和TLR4在HGFs中的表达水平

6、，设低糖组、P．gLPS／低；糖刺激组作对照。4．应用anti．TLR2和anti．TLR4的单克隆抗体对HGFs表面的TLR2、4进行阻断，用高糖或P．gLPS／高糖刺激HGFs12h后，以酶联免疫吸附试验检测1NF—Q、IL—l13的水平，设高糖或P．gLPS／高糖刺激作对照组。结果：1．倒置显微镜下观察细胞培养至第7．10天，少数长梭形细胞从组织块边缘爬出，并围绕组织块呈放射状排列，传代后细胞生长迅速。2．与低糖对照组相比，高糖刺激6h后TNF．a分泌增加且随着时间延长，天津医科大学硕士学位论文TNF．仅分泌明显增加，呈时间依赖性(p<0．05)。虽然IL．1p水平在6h没有明显增加，但

7、在12h时显著升高(P