孕期炎症刺激对子代大鼠血管反应性的影响及其初步机制研究

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1、第三军医大学硕士学位论文孕期炎症刺激对子代大鼠血管反应性的影响及其初步机制研究姓名：贺小艳申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：李晓辉201205第三军医大学硕士学位论文孕期炎症刺激对子代大鼠血管反应性的影响及其初步机制研究摘要高血压(Hypertension，HP)是一种引起高死亡率和高致残率的成年慢性疾病，目前世界上平均协成年人患有高血压，预计到2050年将达到29％。在全球广泛采取一级预防和二级预防措施的情况下，HP的发病率不仅未降，反而逐年升高，提示存在其他重要的致病因素。本研究室将高血压的病因

2、追溯至生命早期(孕期)，选取脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)作为炎症刺激剂，建立了孕期炎症刺激导致子代大鼠血压升高的动物模型；在此模型的基础上，选取了核转录因子kappa．B(Nuclearfactorkappa．B，NF．rd3)这一炎症通路上的关键靶点在母体孕期进行干预，可以阻止子代出生后高血压的发生。在此一系列实验的基础上，我们提出了假说：慢性成年疾病原发性高血压的形成可能要追溯来自于孕期的炎症刺激，即孕期的炎症刺激能导致子代高血压的发生。但关于其机制尚待深入阐明。影响血压的因

3、素复杂，其中血管系统既是血压的调节系统，又是高血压的靶器官；尤其是近年来观察到自发性高血压大鼠(Spontaneouslyhypertensiverats，SHR)和肾I生高血压大鼠离体主动脉、股动脉、肾动脉、尾动脉和肠系膜动脉平滑肌对缩血管物质的反应性增高，与自发性高血压和肾性高血压的发病机制密切相关。提示高血压的发生与血管反应性异常有密切关系。但孕期炎症刺激致子代血压升高大鼠的血管反应性是否发生了变化?若有变化，有何特征及规律，以及其发生的机制等科学问题均有待阐明。为此，本课题拟通过研究孕期炎症刺激对

4、子代大鼠血管反应性的影响来研究子代大鼠血压升高的机制，同时进一步对影响血管反应性的机制进行研究。拟通过测定各组子代大鼠离体血管条对收缩剂去甲肾上腺素(Norepinephrine，NE)和舒张剂硝普钠(SodiumNitroprusside，SNP)的反应性，明确孕期炎症刺激对子代大鼠血管反应性的影响；通过观察子代大鼠血管局部AngII及其ATl、AT2受体蛋白水平的变化，血管内皮eNOS活性的变化，子代大鼠血管组织NF．rB激活状况以及血管组织炎症因子水平，并同时给予NF．rd3抑制剂PDTC观察其逆转

5、情况来研究孕期炎症刺激对子代大鼠血管反应性影响的机制；旨在探索孕期炎症刺激对子代大鼠血管反应性的影响及初步机制，为深入探明高血压的发病机制及寻找新的防治靶点提供实验依据。7第三军医大学硕士学位论文方法：1．孕鼠分组及给药孕鼠按照随机数字表的方法随机分为4组。正常对照组：在孕第8-14天每天腹腔注射无菌生理盐水O．5ml；LPS模型组：在孕第8、10、12天腹腔注射LPSO．79mg／kg，孕第9、11、13、14天给予生理盐水；LPS+PDTC组：在孕第8、10、12天腹腔注射LPS0．79mg／kg，孕

6、第8～14天每天腹腔注射PDTC100mg／kg；PDTC组：在孕第8-14天，每天腹腔注射PDTC100mg&g。2．子代大鼠血压的测量子代大鼠应用尾套法测大鼠尾动脉血压，时间均在测量当天的上午8：00～12：00。每只子鼠每隔3min测量一次，测3次，取平均值。3．子代大鼠血管反应性的测定选用去甲肾上腺素(NE)作为收缩剂，硝普钠(SNP)作为舒张剂，采用恒温灌流系统，血管环离体测定的方法测定16周龄子代大鼠血管收缩和舒张反应性。4．AngII及其受体的蛋白水平测定采用免疫组织化学方法测定5周龄和16

7、周龄子代大鼠血管组织AngII蛋白水平；采用Westernblotting方法测定5周龄和16周龄子代大鼠血管组织AngII受体ATl和AT2蛋白水平。5．血管组织eNOS和P．eNOS蛋白水平测定采用免疫组织化学方法测定血管组织5周龄和16周龄eNOS和P．eNOS的蛋白水平。6．血管组织NF-r．Bp65蛋白水平及IM和TNF吨水平测定采用免疫组织化学方法测定血管组织5周龄和16周龄NF．rJ3p65的蛋白水平；采用ELISA方法测定血管组织5周龄和16周龄的IL．6和TNF．c【水平。结果1．孕期炎

8、症刺激对子代大鼠血压的影响LPS模型组子代大鼠血压与正常对照组相比较，在8周龄时出现显著性升高(p