无保护剂的玻璃化冷冻对人精子运动状态、形态和DNA完整性的影响

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1、目录一英文缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1二中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2三英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4四前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6五实验内容⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8第一部分材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8第二部分实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯000⋯⋯⋯1l第三部分讨论及结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13第四部分参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16六文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯000⋯⋯⋯⋯17第一部分人类精子冷冻概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17第二部分影响人类精子冻融的因素⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22第三部分冷冻对人类精子的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28第四部分参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34七附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41八附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯000⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46九致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯000⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5l英文缩写AIAIDALHARARTBCFCASACPMDMSODNAHIVICSIIVF-ETLI

3、NMADMESAPESAPROHPVPSDISTRTESETZIVAPVCLVSLWOB英文缩略词表中文全称人工授精供精人工授精精子头侧摆幅度lIIIIIIIIIIHIllllWill』Y2372211孕酮诱导顶体反应辅助生殖技术鞭打频率计算机辅助精液分析冷冻保护剂二甲基亚砜脱氧核糖核酸人类免疫缺陷病毒卵母细胞胞浆内单精子注射体外受精一胚胎移植直线性平均移动角度显微外科附睾精子抽吸术经皮附睾穿刺精子抽取术l，2一丙二醇聚乙烯吡咯烷酮精子畸形指数前向性睾丸精子抽取术畸形精子指数平均路径速度曲线速度直线速度摆动性中文摘要目的：尝试一

4、种微型载体——微滴，在不添加冷冻保护剂的情况下进行精子玻璃化冷冻，探讨微滴法无保护剂玻璃化冷冻精子的可行性，为临床保存微量精子提供一条可选择的思路。比较无冷冻保护剂的玻璃化冷冻法与常规慢速冷冻法对人精子冷冻复苏效果的影响，为临床优选适宜的冷冻方法提供实验依据。方法：30份不育患者的精液标本，上游制备后分别进行常规慢速冷冻和微滴法无保护剂的玻璃化冷冻，比较精子冷冻前后的运动状态、形态和DNA的完整性。结果：l、与冷冻前精子相比，常规慢速冷冻和无保护剂的玻璃化冷冻这两种方法保存复苏后a级、b级、a+b+c级精子百分率均明显下降(P<

5、0．01)，VCL、VSL、VAP、MAD、ALH、BCF、LIN、STR均显著低于冷冻前(PO．05)，但a级、b级精子百分率玻璃化冷冻组显著高于常规慢速冷冻组(P

6、)；无保护剂的玻璃化冷冻方法保存复苏后形态正常精子百分率比较差异无显著性(P>0．05)。这两种冷冻方法复苏后，形态正常精子百分率玻璃化冷冻组明显高于常规慢速冷冻组(P<0．01)。3、与冷冻前精子相比，常规慢速冷冻和无保护剂的玻璃化冷冻这两种冷冻方法保存复苏后精子核DNA完整性降低均显著下降(P<0．Ol，P

7、精子核DNA的完整性均有所下降，但较之常规慢速冷冻保存方法，对于精子运动状态、形态及精子核DNA的完整性的不良影响要小一些，其差别具有统计学意义。且用这种方法冷冻精子简单、快速，不需专门的2冷冻设备，微型载体承载微量体积，尤为适用于微量精子的冻存。故而，无保护剂的玻璃化冷冻法将成为冷冻精子的又一选择，为临床微量精子的冷冻提供了一条新的思路。关键词：玻璃化冷冻；微滴；常规慢速冷冻；精子运动；精子形态；DNA完整性AbstractEffectofcryoprotectant—freevitrificationonMotility，m

8、orphology，andDNAintegrityofhumanspermatozoaObjective：Todiscussthefeasibilityofdropletstovitrifyhumanspermatozoawithouttheuseofcryop