结缔组织生长因子基因沉默对裸鼠模型瘢痕疙瘩中胶原代谢的影响

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1、研究生个人简介杜勇，男，汉族，1986年3月出生，山东省聊城市人。本科就读于山东省滨州医学院临床医学专业，在校期间通过英语六级考试。2010年9月考入徐州医学院，攻读整形外科学硕士学位。读研期间，该生按照科学型硕士研究生培养方案进行了理论知识、科研实验及临床技能的学习，修完相关必修及选修课程，获得33．5个学分；在此期间申请江苏省研究生科技创新计划项目，获得立项；通过了国家执业医师资格考试；加入中国共产党，并获得江苏省“省级优秀干部”等荣誉；顺利通过毕业论文盲审及毕业答辩。目录缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．2Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．6材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．91材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．92方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．12结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．23讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．34结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．39参考文

3、献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．43攻读硕士学位期间发表学术论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．52临床培训小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．53致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．55论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．56论文使用授权声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．56论文审阅认定书⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．57缩略词bpcDNACOL．IC

4、TGFDAB枷20dmFBHSⅡICⅡ己KKFBPBSrmpRNAiRr-PCRsiRNATGF-p英文全称Basepair缩略词表Abbreviation中文全称碱基对Complementarydeoxynloonucleicacid互补脱氧核糖核酸Collagen-II型胶原蛋白Connectivetissuegrowthfactor结缔组织生长因子Diaminobenzidine二氨基联苯胺Doubledistilledwater双蒸水Deoxy-ribonucleosidetriphosplate三磷酸脱氧核糖核苷FribroblastHypertrophicscarIrnm

5、unohistochemistryInbibitionrateKeloidKeloid丘ibroblastPhosphate-bufferedsalineRollsperminuteRNAinterference成纤维细胞增生性瘢痕免疫组织化学抑制率瘢痕疙瘩瘢痕疙瘩成纤维细胞磷酸盐缓冲液每分钟转速RNA干扰Reversetranscriptionpolymerasechain反转录多聚酶链反应reactionSmallinterferingRNA小干扰RNATransfergrowthfactor-13转化生长因子．p结缔组织生长因子基因沉默对裸鼠模型瘢痕疙瘩中胶原代谢的影响中文摘要

6、目的在前期细胞学实验基础上，利用CTGFsiRNA重组质粒特异性沉默裸鼠模型瘢痕疙瘩中结缔组织生长因子，观察分析转染后标本中CTGF、I型胶原代谢变化及二者之间有无相关性，反向说明CTGF基因对瘢痕疙瘩生成的意义，为瘢痕疙瘩的基因治疗提供依据。方法1．取临床上未经治疗的瘢痕疙瘩小组织块(8X8×5ram3)植入裸鼠皮下，携带一段时间(16天)后，取出标本进行各种染色后光镜下分析比较标本植入前后变化，检测模型成功与否。2．将细胞学实验部分构建特异性沉默CTGFmRNA片段的质粒，导入DH5a菌中，扩增足够剂量质粒，以脂质体为载体，待体内转染。3．按照比例混合CTGFsiRNA重组质粒与

7、脂质体，在动物模型成功构建第16天注入实验组瘢痕标本内，阴性组、脂质体组及空白组标本分别在同时间注射等量非特异性重组质粒与脂质体混合液、脂质体液及PBS液，质粒注射第7天获取标本。4．逆转录聚合酶链反应方法检验转染后CTGFmRNA及COL-1mRNA表达的效果；免疫组织化学方法检测转染后，阻碍内源性TGF．13／CTGF信号转导条件下标本中CTGF及COL-1的表达情况。5．采取裸鼠血液检测转染对动物模型有无毒副作用。结果1．裸鼠动物模型构建成功，标本植