人硒蛋白PcDNA探针的制备及其在肝脏组织中的表达

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1、人硒蛋白PcDNA探针的制备及其在肝脏组织中的表达作者：南克俊隋晨光韩王月刘彦仿胡沛臻秦海霞景钊刘陕西【关键词】人硒蛋白P　　PreparationofhumanselenoproteinPcDNAprobeandexpressioninhumanhepatictissue　　【Abstract】AIM:ToinvestigatetheexpressionofselenoproteinPmRNAinhepaticdiseases,includingcirrhosisandhepatocellularcarcinoma(HCC).METHODS:SelenoproteinPcDN

2、AfragmentwasamplifiedbyPCRtheexpressionofSelenoproteinPmRNAwasdetectedin13casesofnormalliver,20casesofcirrhosisand30casesofhepatocellularcarcinoma(HCC)byinsituhybridization.RESULTS:ThePCRproductsevaluatedbyelectrophoresiswereasexpected.TheexpressionofselenoproteinPmRNAwasfoundinthetissuestro

3、maofliver,especiallyintheendothelialcellsofvasculature.ThepositiveexpressionrateofselenoproteinPmRNAwas84.6%(11/13),50.0%(10/20),20.0%(6/30)respectivelyinnormalliver,cirrhosisandHCC.Therateofexpressioninhepaticcarcinomawas12significantlylowerthanthatinothers(χ2=15.84,P<0.005;χ2=4.96,P<

4、0.05).Thepositivebluegranuleswereseendistributedinthenucleusandcytoplasminnormalliverandcirrhosisliver.Theexpressioninnucleusofnormalliverwassignificantlyhigherthanthatofcirrhosisliver.InHCC,thepositiveparticleswerelocatedincytoplasm,butnucleolusshowedalmostnostaining.CONCLUSION:Theexpressio

5、nofhumanselenoproteinPgeneissignificantdifferentinthethreekindsoflivertissues,suggestingthatselenoproteinPmayplayaroleintheoccurrenceanddevelopmentofHCC.　　【Keywords】humanselenoproteinP;cDNAprobes;PCR;insituhybridization;carcinoma,hepatocellular　　【摘要】目的：探讨SeP基因与肝脏疾病特别是肝癌发生发展的关系.方法：采用美国Georgia

6、大学惠赠的质粒PBluescriptHumanSelenoproteinP，用PCR法制备人SePcDNA探针，检测了13例正常肝脏、20例肝硬化、30例肝癌组织中SePmRNA的表达水平.结果:PCR产物经电泳鉴定与预期相符.3种肝脏组织的组织间质均有SePmRNA表达，主要位于脉管区的血管内皮；正常肝细胞、肝硬化肝细胞及肝癌细胞中SePmRNA阳性率分别为84.6%，50.0%，20.0%.肝癌细胞阳性表达率明显低于其他两组（χ2=15.84,12P<0.005;χ2=4.96,P<0.05）.正常肝细胞和肝硬化肝细胞的胞质及胞核内均出现蓝色的阳性颗粒，在胞核主

7、要分布在核仁与核周；正常肝细胞的核阳性强于肝硬化肝细胞.HCC细胞阳性表达颗粒位于胞质，胞核几无表达.结论:人SePcDNA探针制备成功，可用于人体组织SePmRNA的原位检测.肝癌细胞中存在SePmRNA的表达缺失，SeP基因的缺失可能与肝癌的发生有关.　　【关键词】人硒蛋白P；cDNA探针；PCR；原位杂交；癌，肝细胞　　0引言　　硒是人体必需的微量元素之一，参与GSHPx的合成，具有抗氧化损伤作用［1］，流行病学调查表明缺硒可导致恶性肿瘤的发生［2］.实验证实食物中添加硒可以减少前列腺