人硒蛋白p cdna探针的制备及其在肝脏组织中的表达论文

《人硒蛋白p cdna探针的制备及其在肝脏组织中的表达论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、人硒蛋白PcDNA探针的制备及其在肝脏组织中的表达论文南克俊隋晨光韩王月刘彦仿胡沛臻秦海霞景钊刘陕西【关键词】人硒蛋白PPreparationofhumanselenoproteinPcDNAprobeandexpressioninhumanhepatictissue【Abstract】AIM:ToinvestigatetheexpressionofselenoproteinPmRNAinhepaticdiseases,includingcirrhosisandhepatocellularcarcinoma(HCC).METHODS:SelenoproteinPcDNAfr

2、agmentplifiedbyPCRtheexpressionofSelenoproteinPmRNAalliver,20casesofcirrhosisand30casesofhepatocellularcarcinoma(HCC)byinsituhybridization.RESULTS:ThePCRproductsevaluatedbyelectrophoresisRNAaofliver,especiallyintheendothelialcellsofvasculature.ThepositiveexpressionrateofselenoproteinPmRNAa

3、lliver,cirrhosisandHCC.Therateofexpressioninhepaticcarcinomainnormalliverandcirrhosisliver.Theexpressioninnucleusofnormalliver,butnucleolusshoostnostaining.CONCLUSION:TheexpressionofhumanselenoproteinPgeneissignificantdifferentinthethreekindsoflivertissues,suggestingthatselenoproteinPmaypl

4、ayaroleintheoccurrenceanddevelopmentofHCC.【KeyanselenoproteinP;cDNAprobes;PCR;insituhybridization;carcinoma,hepatocellular【摘要】目的：探讨SeP基因与肝脏疾病特别是肝癌发生发展的关系.方法：采用美国Georgia大学惠赠的质粒PBluescriptHumanSelenoproteinP，用PCR法制备人SePcDNA探针，检测了13例正常肝脏、20例肝硬化、30例肝癌组织中SePmRNA的表达水平.结果:PCR产物经电泳鉴定与预期相符.3种肝脏组织的组

5、织间质均有SePmRNA表达，主要位于脉管区的血管内皮；正常肝细胞、肝硬化肝细胞及肝癌细胞中SePmRNA阳性率分别为84.6%，50.0%，20.0%.肝癌细胞阳性表达率明显低于其他两组（χ2=15.84,.freelRNA的原位检测.肝癌细胞中存在SePmRNA的表达缺失，SeP基因的缺失可能与肝癌的发生有关.【关键词】人硒蛋白P；cDNA探针；PCR；原位杂交；癌，肝细胞0引言硒是人体必需的微量元素之一，参与GSHPx的合成，具有抗氧化损伤作用［1］，流行病学调查表明缺硒可导致恶性肿瘤的发生［2］.实验证实食物中添加硒可以减少前列腺癌、结肠癌、肺癌及肝癌的发生［3］.

6、硒的许多生物学功能是通过硒蛋白来实现的，迄今已经发现了18种具有生物功能的硒蛋白，硒蛋白P（SelenoproteinP，SeP）是其中一种［4］.人体几乎所有的组织中都含有SeP，近年来大量研究证实其与多种恶性肿瘤有关，已经成为研究的热点.但从基因水平对肝癌组织中的SeP进行原位检测，目前尚少见报道.因此我们制备了特异性的SePcDNA探针，对正常肝脏、肝硬化、肝癌组织进行核酸原位杂交，检测其表达水平，探讨SeP与肝脏疾病特别是肝癌发生发展的关系.1材料和方法1.1材料质粒PBluescriptHumanSelenoproteinP由美国Georgia大学惠赠，全长为6.

7、4kb，为氨苄青霉素抗性（Amp+），宿主菌为JM109.小量质粒提取试剂盒、PCR产物纯化试剂盒购自上海华舜生物工程有限公司.TaqDNA聚合酶购自华美生物工程公司.DNAMarker购自大连Takara公司.地高辛标记和检测试剂盒购自德国BoehringerMannheim公司.13例正常肝脏标本取自非肝脏疾病的尸检患者及肝移植的供肝者，30例肝硬化及30例原发性肝细胞肝癌（HCC）标本取自西安交通大学第一医院1999/2001间手术切除标本，肝硬化和HCC均经病理诊断证实.所有标本经40gL-1甲醛固定，常规