免疫亲和柱净化—柱后电化学衍生—HPLC法测定玉米及花生酱中的4种

《免疫亲和柱净化—柱后电化学衍生—HPLC法测定玉米及花生酱中的4种》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、免疫亲和柱净化—柱后电化学衍生—HPLC法测定玉米及花生酱中的4种黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2应用作者摘要杨新磊新磊安蓉本文采用免疫本文采用免疫亲和和柱柱净化结合合柱后柱后电化学衍衍生生-HPLC-荧光方法光方法检测了玉米及米及花生酱中中的的液相色液相色谱产品品工程工程师4种曲霉毒素种黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2。品。样品提取后，先提取后，先经免疫免疫亲和柱和柱净化、化、浓缩，再进入生命科生命科学与化与化学分分析事析事业部HPLC系统进行分离分离、定量。四种、定量。四种黄曲曲霉毒素在霉毒素在0.1~10µg/L内线性相性相关系数R2>安捷抡科技0.99998

2、，出限，检出限（按S/N=3计算）为0.004~0.007µg/L（相（相当于0.008~0.014µg/kg上海，中上海，中国样品品出限）检出限）。以10µg/L黄曲霉毒素曲霉毒素标准溶液为考察对象，象，连续6针进样，得得出四种出四种黄曲霉毒素的保留霉毒素的保留时间相对标准准偏差偏差(RSD)<0.1%，峰面积RSD<0.3%。明。实验证明，，该方方法法可、可有效、准地准确地用用于米于玉米及及生等品花生酱等样品中曲中黄曲霉霉毒毒素素的定的测定。。引言黄曲曲霉毒素是霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉的代曲霉和寄生曲霉的代谢产物，物，广泛泛存在于存在于自然然界中。界中。最常见的

3、黄曲曲霉毒霉毒素有B1、B2、G1、G2等，其中等，其中B1毒性毒性最强，G1次之，B2、G2较弱。弱。由于黄曲霉毒曲霉毒素的素的强毒毒性和性和强致癌性，致癌性，许多国家家和和组织机构均规定定了食品中的了食品中的黄曲霉毒素的限量值。曲霉毒素的限量值。其中，其中，欧盟规定了定了坚果、玉米、米、果脯等脯等农作物中物中黄曲霉毒素曲霉毒素B1的量的含量不不得得超超过2.0~8.0µg/kg，B1、B2、G1和G2的量不的总量不得于得高于4.0~15.0µg/kg[1]。美。美国FDA分定分别规定了了食物和食物和动物饲料中的中的4种曲霉种黄曲霉毒毒素素的量的总量不不得得超超过

4、20和300µg/kg[2]。因此，建立准。因此，建立准确、的曲、有效的黄曲霉霉毒毒素素的定的测定方方法法非重。非常重要。由于于物农作物和和食食品品中中的的黄曲曲霉霉毒毒素素的的含量量都低都比较低且且样品品基基质非非样品前处理方法常复杂，，免疫免疫亲和和柱柱净化结合合柱柱前（（后）衍生、后）衍生、HPLC-FLD检称取25g待品待测样品于速器于高速匀质器中中，，加入入2g氯化氯化钠和125mL甲测的方法越的方法越来越越多地多地应用于各种用于各种样品品的分析。本文的分析。本文综合考虑色谱醇/水(60/40,V/V)，速拌，高速搅拌匀质1min后，入后，加入125mL去

5、离峰柱柱后后扩散、分析速度、分离度及散、分析速度、分离度及灵敏敏度，建立了免疫度，建立了免疫亲和和柱柱净子水水稀稀释提提取液。取液。手动混合混合均匀后，立即取后，立即取40-50mL该提取液提取液过化-柱后柱后电化学(Br2)衍生快速衍生快速测定黄曲曲霉毒素的霉毒素的HPLC-FLD方WhatmanNo.4滤纸，取，取续滤液10mL（相（相当于1g样品）上品）上样于法成法成功用于米和生中的曲霉毒素的分析。功并用于玉米和花生酱中的黄曲霉毒素的分析。预先先化好的活化好的AFLAPREP®免疫免疫亲和柱和柱（化程序（活化程序参考亲和柱明和柱说明书）[3]，以，以2-3mL

6、/min流速流流速流过免疫免疫亲和和柱，用柱，再用10mL去离子实验部分水洗水冲洗免免疫和疫亲和柱抽近。密柱并抽至近干。精密移移取取1mL甲醇于免疫甲醇于免疫亲和仪器及装置柱柱，以，以手动方式，用方式，用2mL注射器注射器将甲醇甲醇缓慢推慢推过免疫免疫亲和柱（必和柱（必要时，可用甲醇反，可用甲醇反冲免免疫疫亲和柱以保和柱以保证黄曲霉毒素的曲霉毒素的完全洗脱），Agilent1260Infinity液相色液相色谱系统，包括溶剂架架，，四元泵四元泵（置（内置脱完全收集洗收集洗脱液液，用，并用1mL去离离水子水稀稀洗液释洗脱液，，混混后匀后过气）气机），标准准器自动进样器

7、，，柱柱温箱箱，，荧光光检测器器。。拜拜发公司司KOBRA0.22µm滤膜，待膜，待测。电化衍生置，化学衍生装置，包括电化化衍生池、学衍生池、可控制源、可变控制电源、0.5mm内径PEEK管（管（至少34cm）等。）等。方法线性范围、检出限和精密度分配分别配制制0.1、0.25、0.5、1.0、5.0、10.0µg/L四种四种黄曲曲霉毒素霉毒素HPLC方法B1、B2、G1、G2的混合的混合标准溶液液（稀（稀释剂为MeOH/H2O=色柱色谱柱:ZorbaxEclipsePlusC18，4.6x150mmx5µm50/50），上述，按上述HPLC方方法分析，法分析，