免疫亲和柱-高效液相色谱法测定饲料中的t-毒素

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1、免疫亲和柱-高效液相色谱荧光检测法测定饲料中的T-2毒素林淼，赵志辉*，韩薇（上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所，上海201403）摘要:建立了免疫亲和柱净化-柱前衍生化-高效液相色谱荧光检测器测定饲料中T-2毒素含量的方法。样品经甲醇-水（体积比80：20）提取，通过免疫亲和柱（IAC）净化，以氰酸蒽（1-AN）为衍生化试剂、4-二甲基氨基吡啶(DMAP)为催化剂进行衍生，C18色谱柱分离，荧光检测器检测，外标法定量。结果表明：T-2毒素的线性范围为10~200μg/L，加标回收率为76.9~92.1%，相对标准偏差(RSD)小于6%。该方法可用于饲料中T-2毒素的

2、测定。关键词:免疫亲和柱；柱前衍生化；高效液相色谱；饲料；T-2毒素DeterminationofT-2ToxininfeedbyHighPerformanceLiquidChromatographywithFluorescenceDetectionafterimmunoaffinityColumnClean-UpLINMiao，ZHAOZhi-hui*，HanWei(InstituteforAgri-foodStandardsandTestingTechnology,ShanghaiAcademyofAgriculturalSciencesy,Shanghai201403,Ch

3、ina)Abstract：AmethodhasbeendevelopedforthedeterminationofT-2toxininfeedbyhighperformanceliquidchromatographywithfluorescencedetectionafterimmunoaffinitycolumnclean-upandprecolumnderivatization.Thederivatizationreactionwasusedtodevelopasensitive,reproducibleandaccuratemethodforthedetermination

4、ofT-2toxininfeed.T-2toxinwasextractedwithmethanol-water(80∶20,v/v),purifiedbyimmunoaffinitycolumnscontainingantibodiesspecificforT-2toxin,andquantifiedbyreversedphasehighperformanceliquidchromatographywithfluorescencedetectionafterderivatizationwith1-anthroylnitrile(1-AN)第一作者：林淼（1981－），女，研究实习

5、员，主要从事农产品检测研究。E－mail:linmiao0224@hotmail.com通讯联系人：赵志辉（1970－），男，研究员，主要从事农产品检测研究。E－mail:zhao9912@hotmail.com基金项目：1、国家标准《饲料中T-2毒素的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法》编制说明，项目编号：1120091339-T-469,2、上海市科技兴农重点攻关项目，项目编号：沪农科攻字（2009）第6-1号and4-dimethylaminopyridine(DMAP).Theresultsshowthelinearrangeofcarnitineis10~200μg/L

6、,therecoveryis76.9~92.1%,RSDisunder6%.ThemethodhasbeenappliedtothedeterminationofT-2toxininfeedwithsatisfactoryresult.Keywords：immunoaffinityprecolumnderivatization;highperformanceliquidchromatography;feed;T-2toxinT-2毒素（T-2Toxin)是一种倍半萜烯化合物，学名为4β-1,5-二乙酰氧基-8α-(3-甲基丁酰氧基)-3α-羧基-12,13-环氧单端孢霉-9-烯，

7、为白色针状结晶,室温下稳定,烹调过程不易将其破坏[1]；熔点为150～151℃；难溶于水；易溶于极性溶剂。分子式为C24H34O9,相对分子质量为466.51[2]，其结构式如图一。T-2毒素是单端孢霉烯族毒素(trichothecenes)中危害最大的毒素之一，T-2毒素作为一种常见的真菌毒素，在自然界中广泛存在，主要污染小麦、大麦、玉米等粮食作物，人误食污染的谷物后，可引起呕吐、腹泻、发烧等中毒症状。受T-2毒素污染的饲料可引发动物发生食欲不振，精神沉郁，唇、口腔黏膜溃疡和坏