全合成全套抗体库的构建

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1、山东大学硕士学位论文全合成全套抗体库的构建姓名：张逸申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：王玉萍;黄华梁20040521原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：逛垒日期：尘!!!：!!：2，／关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，

2、同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：i丝立导师签名：墨墨l；日期：基竺!±：坚：叫山东大学硕士学位论文摘要抗体是包括人在内的脊椎动物体内最复杂的分子，它以其特有的基因结构和重组形式形成巨大的多样性，不仅为机体提供了有效的保护，而且也成为科研、临床和诊断等领域的重要工具，因此，抗体技术的发展一向为人们所关

3、注。目前医用抗体主要来源于动物，这些非人源的抗体分子对于治疗病人的急性感染或中毒反应有很好的疗效，但如果反复作用，人体会将之视为异源物而产生免疫排斥，这大大地限制了抗体在医疗领域的应用。解决这一问题的途径是使用人源化的抗体来代替非人源的抗体，而基因工程抗体技术能很好地实现这一途径。利用基因工程手段，人们可以按照需要对抗体进行改造和得到自然界原本不存在的新抗体。现在一般所指的基因工程抗体技术包括鼠单抗的人源化改造技术，小分子抗体技术，转基因鼠技术和抗体库技术等。其中，抗体库技术功能最为强太，其发展也最为引人注目。本实验的目

4、的是基于抗体的一套一致框架，结合随机化合成的CDRs盒，构建一个全合成的全套组合抗体库。论文以VH3V1(3为一致框架的部分抗体库的构建为例，描述了全套组合抗体库的构建过程。分为以下几步，首先是对重排后和胚系状态的抗体结构进行聚类分析，提炼出14条通用的一致框架(重链7条，K轻链4条，X轻链3条)代表14个抗体家族。用一段dummy序列代替一致框架中的CDRs区。然后选择E．coli偏爱的密码子，化学合成这些一致框架的基因，同时在CDRs的两侧保留单一的内切酶位点。基因采用分段合成的方式，用SOE．PCR拼接成完整的vH

5、或VL基因，进一步拼接得到ScFv。采用分组式合成的方法合成随机化的CDR3亚库，内切酶消化后，取代一致框架中的相应部分，构建成库。挑取7个克隆进行连接产物的PCR鉴定，阳性率超过86％；Western—blot分析结果表明单链抗体在大肠杆菌中的表达率约为88％；对16个克隆进行基因测序分析，结果表明实现了抗体库的完全随机化。初步证实了基于一致框架而随机化CDRs区的全合成抗体库策略的可行性。关键词：抗体库基因PCR全合成随机化山东大学硕士学位论文AbstractAntibodiesarethemostcomplexmo

6、leculesinthebodiesofvibrateincludinghumanbeings．Theyhavegreatdiversitybecauseoftheirspecificgenestructuresandrecombinationmodels，whichenablethemtOeffectively,protectthebodies．Soantibodiesareplayinganimportantroleinclinicalanddiagnosesandaccordingly,thedevelopment

7、ofthetechniquesofantibodyhavealwaysbeenattractingscientists’eyeballs．Techniquesofantibodyhavealwaysbeenattractingscientists’eyeballs．Nowadays，antibodiesusedinmedicinesderivemainlyfromanimalsandthesenon-humanantibodiscanhaveagoodcurativeeffectinacuteinfectionortox

8、icosis，butrepeatedusewillleadtobody’Srejection，whichundoubtedlyrestrictstheirapplication．OnewayoutistousehumanizedantibodiestOreplacenon—humanantibodies．Thetec