肺炎克雷伯菌产超广谱β内酰胺酶耐药质粒的检测与研究

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1、广州医学院硕士学位论文肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶耐药质粒的检测与研究姓名：左斌申请学位级别：硕士专业：呼吸内科学指导教师：刘朝晖20070601￡塑匡兰堕堡主堂堡垒皇￡塑丝墨堕丝塞重鱼堕兰堕塾!堕垄堕塾塑笙型兰塑塑中英文对照缩写词英文全称中文全称ESBLsExtended—spectrumB—lactamases超广谱p一内酰胺酶DHPLCDenaturingHigh—performance变性高效液相色谱LiquidChromatographyKPKlebsiellapneumoniae肺炎克雷伯菌ECEscherichiacoli大肠埃希菌NCCLSNationalCo

2、mmitteeofClinical美国国家l瓶床实验室标LaboratoryStandards准化委员会PCRP01ymerasechainreaction聚合酶链反应DNADeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸BpBasepair碱基对dNTPDeoxynucleotidetriphosphates脱氧核苷三磷酸MDNAMarkerDNA分子量标准SecSecond秒MinMinutej子valvaline缬氨酸11eisoleucine异亮氨酸A1aalanine丙氨酸Thrthreonine苏氨酸Argarginine精氨酸Cyscysteine半胱氨酸Leu

3、1eucine亮氨酸Ginglutamine谷氨酰胺Gluglutamicacid谷氨酸Serserine丝氨酸G1yglycine甘氨酸Lyslysine赖氨酸一l一广州医学院硕士学位论文广州地区肺炎克雷伯菌产ESBLs耐药质粒的检测与研究肺炎克雷伯菌产超广谱B一内酰胺酶耐药质粒的检测与研究研究生：左斌导师：刘朝晖教授中文摘要背景超广谱B-内酰胺酶(Extended—spectrump．1actamases，ESBLs)是由质粒介导的能水解氧亚氨基内酰胺及单环内酰胺类抗生素的一类酶，是导致肺炎克雷伯菌等肠杆菌科细菌对第三代头孢菌素发生耐药的重要机制。产ESBLs菌株可以通过质粒

4、或转座子进行传播，易导致菌株之间传播和院内感染的爆发流行。近年来，产ESBLs肺炎克雷伯菌所致的院内感染己呈世界性流行，成为急需解决的医疗事件和公共卫生问题。由于不同的国家、地区、医院使用抗菌药物的不同，产ESBL肺炎克雷伯菌的检出率、耐药性及基因型也有所不同。不同的基因型ESBL因其活性位点不同，分解底物有所不同。了解本地区ESBLs基因流行情况对I临床合理用药、防止耐药菌的产生具有重要的意义。测序是目前公认的ESBLs基因分型的“金标准”，但仪器昂贵、操作繁琐、费时费力，不适合作为一种筛查的方法用于ESBL的分子流行病学监测。变性高效液相色谱分析(denaturinghigh

5、performanceliquidchromatography,DHPLC)是在部分变性的条件下，异源双链因错配区的存在，在色谱柱保留时间短于同源双链，而先被洗脱出来，DHPLC具有简便快捷、准确灵敏和高通量、自动化的特点，被应用于对已知或未知的基因突变、小片段插入或缺失等DNA序列变异的筛查。近年，国外学者运用PCR-DHPLC技术对耐氟喹诺酮淋病双球菌、耐喹诺酮金黄色葡萄球菌、耐喹诺酮肠道沙门氏菌、耐环丙沙星鼠疫耶尔森菌进行分析，结果表明通过选择合适的DHPLC分析条件如柱温、缓冲液梯度、流速和洗脱时一2一广州医学院硕士学位论文广州地区肺炎克雷伯菌产ESBLs耐药质粒的检测与

6、研究间等，可据DHPLC洗脱峰峰型和出峰时间检测和辨别出耐药菌株，是一种很有应用前景的快速检测方法。．第一部分：产ESBLs菌株的筛选和药敏试验目的确定产ESBLs肺炎克雷伯菌及了解产ESBLs菌株对常见抗生素的耐药情况方法采用美国临床实验室标准化委员会推荐标准确定产ESBLs菌株；用纸片扩散法测定产ESBLs菌株对常见抗菌药物的耐药性，以大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603为质控菌。结果1．肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株的检出率为29．8％(57／191)。产ESBLs菌株主要来源于呼吸内科21．1％(12／57)，其次为老年病科19．3％(11／57

7、)、ICUl2．3％(7／57)、泌尿外科12．3％(7／57)、脑内科7．0％(4157)、血液内科3．5％(2／57)等。2．产ESBLs肺炎克雷伯菌对大部分B一内酰胺酶、氨基糖苷类及喹诺酮类抗生素耐药严重，其中对头孢他啶、头孢噻肟的耐药率分别为61．4％和75．4％。半数以上的产ESBLs菌株对头孢吡肟敏感，亚胺培南对其高度敏感。结论产ESBLs肺炎克雷伯菌对大部分B一内酰胺类抗生素耐药严重。第二部分：变性高效液相色谱检测ESBLs的实验研究目的探讨TEM型及SHV型最适的