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1、现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2009,Vol.25,No.11果胶酶液体发酵条件与分离纯化的研究全桂静，王硕（沈阳化工学院环境与生物工程学院，辽宁沈阳110142）摘要：果胶酶在工业生产中应用比较广泛,主要由微生物发酵生产。本实验通过液体摇瓶发酵，采用氧化法测定酶活性，研究不同条件对曲霉发酵果胶酶的影响。采用盐析及有机质沉淀等方法分离酶蛋白。结果表明最适发酵培养基的组成（g/L）：蔗糖20，KNO320，硫酸镁5，硫酸钙5，磷酸二氢钾5，橘子粉碎物30；适宜的发酵条件为
2、初始pH2.0，发酵温度22℃，250mL摇瓶的装液量为90mL，发酵时间51h，果胶酶活性可以达到11.40U/mL。经过试验比较，发现通过丙酮沉淀得到的果胶酶粗酶蛋白比活力较高，可以达到1170.4U/mg。关键词：果胶酶；液体发酵；分离纯化中图分类号：TQ920.1；文献标识码：A；文章篇号:1673-9078(2009)11-1338-04StudyofLiquidFermentationandPurificationofPectinaseQUANGui-jing,WANGShuo（CollegeofEn
3、vironmentandBiotechnology,ShenyangInstituteofChemicalTechnology,Shenyang110142,China）Abstract:Inthisexperiment,pectinasewasproducedviaflaskcultureanditsactivitywasdeterminedbyoxidation.Theenzymewasseparatedbysalting-outand/orprecipitationwithorganicmatter.The
4、resultsshowedthattheoptimummediumcomposition(g/L)wereSucrose20,potassiumnitric20,magnesiumsulfate5,calciumsulfate5,potassiumdihydrogenphosphate5,andorangesmashing30.Andtheoptimumfermentationconditionsfor100mLfermentationmediumin250mLflaskwere:initialpH2.0,tem
5、perature26℃,andfermentationtime51h.Undertheseconditions,Pectinaseactivityreached11.40U/mL.Thepurificationtechnologydirectlyaffectstheoutputandthequalityofpectinase.Itwasfoundthatactivityofpectinasepurifiedbyacetonewashigherthanthoseachievedbyothermethods,bein
6、gof1170.4U/mg.Keywords:pectinase;liquidfermentation;purification果胶酶是分解果胶物质的一类酶的总称。在食品胶酶发酵的酶活力低,导致生产成本高，限制了该酶加工、饲料加工、纺织、造纸、环境保护、诱导植物的广泛应用。果胶酶分离纯化的方法有很多种，可根[1][7]抗病等方面都有重大的应用价值。果胶酶还被用于据具体情况选择应用。本实验主要研究影响果胶酶研究制取功能性寡糖，并且随着植物病理学研究的深液体发酵的所有因素，同时考察了果胶酶分离的方法。入，果胶酶及其水
7、解物应用于植物诱导抗病的研究报1材料与方法道也日渐增多。果胶酶可源于动物、植物和微生物，但动、植物1.1菌种天然来源的果胶酶产量低且提取困难，不能满足生产曲霉，实验室筛选并保藏和实验的需要。许多霉菌及少量的细菌和酵母菌都可1.2培养基[1-3][8]产生果胶酶，主要以曲霉和杆菌为主。国内对果胶种子培养基：查氏培养基。酶的研究始于20世纪60年代,研究人员在果胶酶的发酵培养基（g/L）：蔗糖20，硝酸钾20，硫酸镁[4]菌种选育、生产工艺和应用等方面做了许多工作。5，磷酸二氢钾5，pH自然。杨辉等以苹果渣为产酶诱导
8、剂，利用黑曲霉3.324菌1.3方法[5]株固态发酵产果胶酶活力为174.54U/g。张健红等从1.3.1单孢子悬液的制备腐烂的苹果表皮分离获得一株芽孢杆菌WSHB04-02，利用无菌水将培养48h的曲霉斜面孢子洗下，振[6]7液体发酵产碱性果胶酶活力为34U/mL。目前国内果荡制得10个/mL左右的单孢子悬液。收稿日期：2009-07-271.3.2液体发酵作者简介：全
