包囊化双歧联菌保护失血性休克大鼠肠道屏障功能的实验研究

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1、中山大学博士学位论文包囊化双歧联菌保护失血性休克大鼠肠道屏障功能的实验研究姓名：阮祥才申请学位级别：博士专业：外科学指导教师：王深明20080418博士学位论文包囊化双歧联菌保护失血性休克大鼠肠道屏障功能的实验研究由于失血性休克后肠道细菌或毒素移位只是肠道源性病情进展的一部分，现已经证实另外的一个重要部分就是肠粘膜缺血再灌注损伤所产生的多量氧自由基释放，进而使促炎因子产生和释放增加。双歧杆菌在肠道的免疫调节作用已经得到证实，双歧杆菌另外的一个突出的特性是对多种自由基有清除作用，可能是由于双歧杆菌阻碍了自由基链式反应或菌体表面蛋白质发挥了自由基淬灭作用，具体机制还不清楚。结合上述进展，我们推

2、测，双歧杆菌可能保护失血性休克及复苏后肠道屏障功能。在本研究中，我们观察给予双歧杆菌(包括青春型、两性和成年型)处理对大鼠创伤／失血性休克模型肠道屏障功能的影响，分为两个部分，分别从减轻失血性休克及复苏大鼠细菌移位、肺损伤两个角度，来探讨活性双歧杆菌可能存在的肠粘膜屏障功能保护和MODS防治作用。双歧杆菌应用的一个困难是它的脆弱性使它难以达到肠道，为了保护细菌胞体不受胃酸环境的损伤而增加到达肠道的双歧杆菌数量，我们采用了明胶包被的双歧杆菌微囊技术，并观察其在这一动物疾病模型中的作用，并与传统双歧杆菌制剂对比。期望探讨作为日常服用益生菌的双歧杆菌在创伤失血性休克疾病中的防治作用，为双歧杆菌的

3、进一步开发应用提供实验依据和实践基础。第一部分：活性双歧杆菌减轻失血性休克及复苏大鼠细菌移位目的：判断活性双歧杆菌对失血性休克大鼠肠道细菌移位的保护作用，并进一步观察双歧杆菌活性包囊微粒在这一模型中的作用。拟观察活性双歧杆菌及其包囊对失血性休克大鼠肠道菌群、细菌移位、血浆内毒素和结肠绒毛损伤的效果。方法：SD大鼠每日给予三种不同的食物补充：PBS盐水、双歧杆菌冻干粉(109c呐)或双歧杆菌活性微囊(109c制如y)。经过7d的喂养后，大鼠麻醉后进行失血性休克实验。休克实验结束时，开腹取样分析盲肠的细菌学、肠系膜淋巴结的细菌移位、血浆内毒素和末端结肠的绒毛损伤分析。结果：双歧杆菌处理的失血性

4、休克大鼠的盲肠内容物中总需氧菌数量、总需氧菌细博士学位论文包囊化双歧联菌保护失血性休克人鼠肠道屏障功能的实验研究菌移位幅度、血浆内毒素水平和结肠绒毛水平，均低于盐水处理的失血性休克大鼠。双歧杆菌微囊处理后的这些变化低于单纯双歧杆菌处理的大鼠。失血性休克大鼠双歧杆菌微囊处理后，盲肠内双歧杆菌数量较盐水对照组增加。三种不同处理的失血性休克组之间，总厌氧菌和双歧杆菌细菌移位的幅度没有显著性差异。双歧杆菌微囊处理的失血性休克大鼠中细菌移位比率要比盐水失血性休克大鼠的低(8／20vs．16／20，P<0．01)。第二部分：活性双歧联菌对失血性休克及复苏大鼠肺损伤的作用目的：判断活性双歧杆菌对失血性休

5、克大鼠自由基反应、中性粒细胞激活及其肺部聚集的作用，并进一步观察双歧杆菌活性包囊微粒在这一模型中的作用。通过肠细胞黄嘌呤氧化酶(XOD)、过氧化氢酶(CAT)活力测定、血液中性粒细胞(PMN)粘附因子CDllb、CDl8表达和肺部髓过氧化酶髓过氧化酶(MPO)水平分析双栖杆菌在失血性休克及复苏疾病模型中的效果。方法：SD大鼠每日给予三种不同的食物补充：PBS盐水、双歧杆菌冻干粉(109cMay)或双歧杆菌活性微囊(109cn们ay)。经过7d的喂养后，大鼠麻醉进行失血性休克实验。休克实验结束时，开腹、开胸取样行回肠细胞XOD、CAT活力测定、血液PMN粘附因子CDllb、CDl8表达和肺部

6、MPO分析。结果：三种不同处理的失血性休克大鼠组间总计失血量相似。休克大鼠和假休克大鼠之间，包括盐水组、双歧杆菌组和双歧杆菌包囊组，全血PMN粘附因子CDllb、CDl8表达、回肠细胞XOD和CAT酶活力，以及肺部PMN聚集均有显著性差异。失血性休克大鼠，双歧杆菌预先处理较盐水可抑制回肠细胞XOD酶活力、血PMN粘附因子CDllb、CDl8表达和减轻肺部MPO水平，并增高回肠细胞CAT酶活力，微囊化双歧杆菌处理的失血性休克大鼠的这些改变更为明显。但是，双歧杆菌和双歧杆菌包囊处理的休克大鼠CAT酶活力降低的幅度、全血CDl8表达水平和PMVP差异未达到统计学的显著性。媾士学位论文包囊亿双歧联

7、菌保护失鏖性体克大鼠肠道屏障功能既实验研究结论：双歧杆菌及其微囊化制剂(包括青春型、两性和成年型)可减少失觚性休克大鼠的细菌移位、减轻肺部PMN聚集和损伤，微囊化双歧秆菌可较单纯取歧杆菌更进一步增强这些效果。可能的机制与活性双歧杆菌调节肠道菌群、抑制致病菌过渡增生、保护肠粘膜、清除肠道氧自由基和抑制PMN表达CDllb、CDl8的等机制有关，徽囊化制剂可增加到达肠道的活菌数量丽更具有优势。。经口服用双歧杆菌及其微囊化制剂