制药1 - 副本2

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1、一．名词解释1.蓝白斑筛选：载体上有一段β-半乳糖苷酶基因（LacZ）的α-片段（氨基端），其上有外源DNA的插入位点。受体菌基因组中有突变的β-半乳糖苷酶基因（α-片段缺失），可以被IPTG诱导表达。当载体被引入宿主菌时，两者之间可实现基因内互补，形成具有活性的β-半乳糖苷酶。由α-互补而产生的lac+细菌在诱导物IPTC和生色底物X-gal存在下形成蓝色菌落；外源基因插入载体后，使载体部分lacZ失活，无法进行α-互补，带有重组质粒的细菌将产生白色菌落。2.载体：将外源目的DNA导入受体细胞，并能自我复制和

2、增殖的工具。3.抗生素：由微生物产生，在低浓度下能杀灭和抑制病原体，但对宿主不会产生严重的副作用的物质，或使用化学方法半合成的衍生物和全合成的仿制品。广义的抗生素还包括一些抗肿瘤药、杀虫剂和除草剂。4.酶的固定化：指经物理或化学方法处理，使酶（细胞）限制或固定于特定空间位置，使之不但能连续发挥催化作用，而且反应后酶又可以反复利用的技术。5.基因治疗：广义上来讲是指将某种遗传物质转移到患者细胞内，使其在体内发挥作用，以达到治疗疾病目的的方法。6.盐析：是利用各种生物分子在浓溶液中溶解度的差异，通过向溶液中引入一定

3、数量的中性盐，使目的物或杂蛋白以沉淀析出，达到纯化目的的方法。7.等电点：等电点（pI）：在某一PH的溶液中，氨基酸或蛋白质解离成阳离子和阴离子的趋势或程度相等，成为兼性离子，呈电中性，此时溶液的pH称为该氨基酸或蛋白质的等电点。8.cDNA文库：利用某种生物的总mRNA经反转录合成cDNA，再将这些cDNA与合适载体连接，转入细菌细胞中进行保存和扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。9.连续发酵培养：将种子接入发酵反应器中，搅拌式培养达到一定的菌体浓度之后，同时进

4、行进料、出料的操作，通过控制一定的营养物稀释比率，来进行不间断式培养的方式，称为连续培养。10.融合蛋白：将外源基因与受体菌自身的蛋白质编码基因拼接在一起，并作为一个开放型阅读框架进行表达,由这种杂合基因表达出的蛋白质称为融合蛋白。11.愈伤组织及外植体：外植体：植物体上取出的用于培养和分离细胞的组织或器官 愈伤组织：植物的伤口或外植体的伤口长出的脱分化细胞的薄壁细胞团。12.限制性内切酶：生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切断的酶，即能够限制异源DNA的侵入并使之

5、失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性内切酶13.生化药物：具体运用生物化学研究方法，从生物中经提取，分离，纯化等手段获得的天然存在的生化活性物质或将上述这些物质加以结构改造或人工合成创造出自然界没有的新活性物质，统称生化药物。14.受体细胞：又称为宿主细胞或寄主细胞(hostcell)等，从实验技术上讲是能摄取外源DNA并使其稳定维持的细胞；从实验目的上讲是有应用价值和理论研究价值的细胞。一．解答题：1.基因工程的流程，目的

6、基因获得的几种方法。答：基因工程的流程：(1)分：分离目的基因 (2)切：对目的基因和载体适当切割 (3)接：目的基因与载体连接 (4)转：重组DNA转入受体细胞 (5)筛：筛选出含有重组体的受体细胞 (6)表：目的基因在受体细胞中表达，受体细胞成长为基因改造生物目的基因获得的方法：(1)酶切法直接分离目的基因 (2)PCR直接扩增目的基因 (3)文库法分离目的基因 (4)化学合成目的基因2.酶的固定化，为什么固定化？及其优缺点。答：酶的固定化：指经物理或化学方法处理，使酶（细胞）限制或固定于特定空间位置，使之

7、不但能连续发挥催化作用，而且反应后酶又可以反复利用的技术。优点:（1）可以多次使用，酶的稳定性提高；（2）反应后，酶与底物和产物易于分开，产物中无残留酶，易于纯化； （3）反应条件易于控制，可实现催化反应的连续化和自动控制； （4）酶的利用率高，单位酶催化的底物量增加，用酶量少。缺点：（1）固定化过程中，可能会引起酶活性丧失； （2）只适用于催化可溶性小分子底物的酶促反应，对大分子底物不适合； （3）通常不适用于多酶反应，尤其是需要辅助因子参与的反应。3.单克隆抗体的制备及杂交瘤细胞的筛选方法。答：单克隆抗：通

8、过B细胞杂交瘤技术,获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的抗体. （1）单克隆抗体的制备：（2）杂交瘤细胞的筛选方法：1）HAT选择系统（HAT是含有次黄嘌呤（H）+氨基喋呤（A）+胸腺嘧啶核苷（T）的一种选择性培养基。）2）抗药性选择系统 利用生物细胞对于药物敏感性的差异程度，来筛选杂种细胞的方法，称为抗药性选择系统。3）营养互补选择系统 生物细胞在缺乏某种营养成份时